一分鐘帶你了解動脈平滑肌細胞的原代培養流程

　動脈平滑肌細胞又叫平滑肌纖維，系構成平滑肌的纖維狀長細胞。在制作切片標本時，如肌細胞收縮則可變粗，核也隨之變粗，甚至可出現螺旋形的扭曲。平滑肌細胞外面包有1層肌膜。每個平滑肌細胞周圍有少量纖細的膠質纖維、彈力纖維及網狀纖維，包繞于肌膜的表面。

　　動脈平滑肌細胞培養：取5kg左右實驗兔，于無菌條件下從枕大孔處用大止血箝扳開顱骨暴露并小心取出腦組織放入裝有DMEM的培養皿中，用眼科鑷分離基底動脈后按常規平滑肌方法貼塊培養。

　　細胞原代培養：

　　1、吸除培養瓶內舊培養液。

　　2、D-Hanks液沖洗2遍。

　　3、加入消化液少許，以能覆蓋瓶底為限。

　　4、倒置顯微鏡觀察發現細胞胞質回縮、細胞間隙增大時，立即終止消化。

　　5、吸除消化液，向瓶底注入D-Hanks液數毫升，輕輕轉動培養瓶，把殘留消化液沖掉。

　　6、用吸管吸取培養液輕輕反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液；初次傳代將原代細胞按1：1傳代，此后按1：3進行傳代。

　　7、傳代后細胞放置在37℃，5%CO2孵育箱內培養。

　　平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏。

　　當動脈平滑肌細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持形態學特征和生長特點。