1) 將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒。從冰凍切片機或冰箱取出載有切片的載玻片，交叉放入玻片盒（每邊約6片）或加濕盒中。勿使載玻片相互接觸。
2) 待載玻片達到室溫且未干時，于切片上鋪加PBS，勿使溢出玻片。
3) 稀釋的第一抗體于4℃用微量離心機以13500 g離心2 min (每一載玻片上加40? 50μL抗體，應能蓋住切片）。
4) 用與泵相連的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并從另一端加上抗體，蓋上加濕盒，室溫溫育1 h。
5) 以PBS洗玻片3次（5 min/次)。
從切片一端加入新的PBS緩沖液，由另一端吸去舊的緩沖液。
6) 稀釋的第二抗體于4℃用微量離心機以13500 g離心2 min。以每載玻片40?50μL抗體計。
7) 將第二抗體加于切片上，置加濕盒中室溫溫育1 h。以PBS洗玻片3次（5 min/次)。
8) 將蓋玻片放于紙巾上，滴加1滴Gelvatol于蓋玻片中央。翻轉載玻片放于蓋玻片上，勿施壓。將玻片置工作臺上，用鋁箔覆蓋避光放置30 min，使Gelvatol凝結。
9) 顯微鏡下觀察結果，或置玻片盒中儲于4℃。 展開 | 