實驗概要
免疫酶染色法亦稱免疫酶標組織化學法。標本制備后，首先將其內源酶抑制，接著即可進行免疫酶染色檢查。常規的免疫酶染色法可分為直接法和間接法兩種。前者固定標本中的抗原直接與酶標抗體結合，達到酶染色目的；后者是抗原先與其抗體(第一抗體)結合后，再與酶標抗體(第二抗體)結合，而進行酶染色的。免疫酶染色法的酶底物產物為不溶性物質，可沉著于抗原上，使其顯色。間接法雖然多一步驟，但使用范圍廣。此外，酶標記第二抗體可用酶標記SPA或生物素與親和素系統等代替。
主要試劑
1. 去除內源性酶試劑：1%H2O2甲醇溶液。
2. 空腸彎曲菌免疫血清(第一抗體)：CjC37(雞源)和CjP5(豬源)抗血清，自制。
3. 驢抗兔IgHRP(第二抗體)：自制。
4. 稀釋液與洗液(pH7.4 PBS)。
5. 底物溶液(DABH2O2)：
1) TrisHCl緩沖液(pH7.6，0.05mol/L)。
2) 底物溶液，3,3-二氨基聯苯胺50mg、TrisHCl緩沖液100ml、過濾，4℃冰箱保存。用前加H2O2，最終濃度為0.3%。
實驗材料
空腸彎曲菌
實驗步驟
1. 標本制備：將疑似空腸彎曲菌病料或其培養物涂片，干燥，然后置除去內源性酶試劑中處理及固定10min。
2. 沖洗：用PBS沖洗1次，瀝干。
3. 加抗血清：用稀釋液對CjC37或CjP5抗血清(針對同源菌)作1∶160稀釋，滴加在玻片上，置37℃于濕盒內孵育30min。
4. 洗滌：3次。
5. 加酶標記抗體：用稀釋液對驢抗兔IgGHRP作1∶500稀釋，滴加于玻片上，置37℃于濕盒內孵育30min。
6. 洗滌：3次。
7. 滴加底物溶液：室溫作用20min，用自來水沖洗，終止反應，干燥，光學顯微鏡檢查。
注意事項
1. 涂片后，為了防止玻片上的標本面反置和號碼混亂，應用一小片橡皮膏貼于玻片一端，并用鉛筆編號。
2. 滴加酶染色試劑時，玻片應瀝干，并且各試劑滴加的量不宜過多，以防溢出。
3. 孵育時，溫箱內需放一水槽或將玻片置濕盒內孵育，防止酶染色試劑蒸發或干燥。