【原理及意義】
顆粒性抗原(如細菌、細胞)與相應抗體特異性結合,在適當的電解質環境中形成肉眼可見的凝集塊的現象,稱為凝集反應。包括直接凝集反應(細菌或細胞等顆粒性抗原與相應抗體直接反應出現的凝集現象)和間接凝集反應(將可溶性抗原包被在紅細胞或乳膠顆粒表面,再與相應抗體發生反應出現的凝集現象)。凝集反應廣泛地應用于疾病的診斷和各種抗原性質的分析。
(一)直接凝集反應
(1)玻片凝集反應鑒定細菌
【材料】
1試劑:1∶10稀釋的傷寒桿菌診斷血清,傷寒桿菌、痢疾桿菌24小時瓊脂斜面培養物,生理鹽水。
2器材:玻璃蠟筆,載玻片,毛細吸管。
【方法】
1取清潔玻片一張,用蠟筆劃為三格,并注明號碼。無菌操作下,用接種環于1、2格內加1∶10稀釋傷寒桿菌診斷血清1~2滴,第三格加1~2滴生理鹽水。
2無菌操作下,用接種環取傷寒桿菌培養物少許,混于第三格中,再混于第一格中(不能先混于第一格再混于第三格,因為這樣將使診斷血清混入鹽水而影響對照結果),將細菌與鹽水或血清混合均勻使呈乳狀液。此時取菌量不可過多,使懸液呈輕度乳濁即可。
3同法取痢疾桿菌培養物少許,于第二格內混勻。
4輕輕搖動玻片,經1~2分鐘后肉眼觀察,出現乳白色凝集塊者,即為陽性反應;仍為乳濁液者,即為陰性反應。
(2)玻片凝集反應鑒定ABO血型
ABO血型系統可分為四種血型:A型、B型、AB型和O型。ABO血型系統中有A、B兩種凝集原,紅細胞膜上含A凝集原者稱為A型血,含B凝集原者稱為B型血,同時含A、B兩種凝集原者稱為AB型血,無A、B凝集原者稱為O型血。同時,在人類血清中含有與上述凝集原相對應的天然凝集素,即抗體。ABO血型鑒定是用已知的標準A型血清(含B凝集素)和B型血清(含A凝集素),分別與被鑒定人的紅細胞相混合,依其發生凝集反應的結果判定被鑒定人紅細胞表面所含的凝集原而確定的。在正常情況下,ABO血型系統中只有相同血型的人才能進行輸血,僅在無法得到同型血液的特殊情況下,才可考慮將O型血輸給其他血型的人,而且限定在300mL以內,并且應緩慢輸入。
【材料】
1試劑:標準A血清,標準B血清,酒精棉球,無菌干棉球。
2器材:玻璃蠟筆,載玻片,采血針,毛細吸管。
【方法】
1取清潔玻片一張,用蠟筆劃為二格,注明號碼,并分別滴加標準A血清和標準B血清各一滴。
2無菌操作下,用采血針收集受試者耳垂或指端外周血0.5~1mL。
3分別滴加受試者外周血一滴。
4輕輕搖動玻片,經1~2分鐘后肉眼觀察。如兩者均凝集則為AB型血,均不凝集則為O型血,A標準血清凝集而B標準血清不凝集則為A型血,A標準血清不凝集而B標準血清凝集則為B型血。
(3)試管凝集反應
【材料】
1試劑:1∶10稀釋的傷寒診斷血清,菌液(傷寒桿菌“H”菌液,傷寒桿菌“O”菌液),生理鹽水。
2器材:試管架,小試管,吸管,玻璃蠟筆。
【方法】
1取潔凈小試管14只分兩排排列于試管架上,每排7只依次用蠟筆注明號碼,于每
管中分別加入0.5mL生理鹽水。