幾種誘發性腫瘤動物模型的復制方法

實驗概要

本文介紹了幾種誘發性腫瘤動物模型的復制方法。復制動物腫瘤的方法很多，如將實驗動物用放射線照射或靜脈、局部注射放射性同位素；使用各種化學致癌劑（烷化劑、多環芳香烴類、芳香胺類、氨基偶氮染料、亞硝胺類）；使用植物毒素（如蘇鐵素、黃樟素等）；使用金屬（如鉻、鎳、砷、鎘等）；使用RNA和DNA腫瘤病毒；使用多種致癌性霉菌毒素（其中致癌作用最強者為黃曲霉素）等，均可誘發成各種腫瘤。
誘發性腫瘤模型其數量在誘發性動物模型中占首位。一般是利用致癌物質通過口服、注入、埋藏和涂抹等方式使動物發生腫瘤。
能誘發動物腫瘤的病毒也有不少報導，例如小鼠白血病病毒（MLV）、雞白血病病毒（ALV）和貓白血病病毒（FLV）分別能引起大小鼠，雞和貓白血病。Rous雞肉瘤病毒可使田鼠、雞、鴨、鵪鶉、猴、蛇等多種動物發生肉瘤。貓肉瘤肉毒（FSV）可使大鼠、貓、犬和猴發生肉瘤。人類腺病毒能誘發小鼠、田鼠肉瘤和淋巴瘤。

實驗步驟

1．肝癌

   1) 二乙基亞硝胺（DEN）誘發大白鼠肝癌

取體重250g左右的封閉群大白鼠，雌雄不拘。按性別分籠飼養。除給普通食物外，飼以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，劑量為10mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由飲用。共約4個月可誘發成肝癌。或單用0.005%摻入飲水中口吸服8個月誘發肝癌。

   2) 4-2甲基氨基氮苯（DBA）誘發大鼠肝癌

用含0.06%DBA的飼料喂養大鼠，飼料中維生素B2不應超過1.5～2mg/kg，4～6月就有大量的肝癌誘發成功。

   3) 2-乙酰氨基酸（2AAF）誘發小鼠、狗、貓、雞、兔肝癌

給成年大鼠含0.03%2AAF標準飼料。每日每平均2～3mg2AAF（也可將2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%動物產生肝腫瘤。

   4) 二乙基亞硝胺誘發大鼠肝癌

用劑量為每日0.3～14mg/kg體重，混于飼料或飲水中給予，6～9個月后255/300大鼠發生了肝癌。

   5) 亞胺基偶氮甲苯（OAAT）誘發小鼠肝癌：用1%OAAF苯溶液（約0.1ml含1mg）涂在動物的兩肩胛間皮膚上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。實驗后7～8周即而出現第一個肝腫瘤，7個月以上可誘發小鼠肝腫瘤約55%。或用2.5mgOAAT溶于葵瓜子油中，給C3H小鼠皮下注射4次，每日間隔10天，也可誘發成肝癌。

   6) 黃曲霉素誘發大鼠肝癌：每日飼料中含0.001～0.015ppm，混入飼料中喂6個月后，肝癌誘發率達80％。
2．胃癌

   1) 甲基膽蒽誘發小鼠胃癌

取20g左右的小鼠，無菌手術下，在腺胃粘膜面穿掛含甲基膽蒽（MC）線結。含MC的線結是用普通細線，在一端打結后，將線結置于盛有MC小玻璃試管內，在酒精燈上微微加溫，使MC液化滲入線結。MC濃度為0.05～0.1g 20-甲基膽蒽內浸入10～20根線。手術埋線后4～8個月可誘發成功胃癌。

   2) 用不對稱亞硝胺，劑量為0.25ml/kg體重，3個月后全部動物發生前胃乳頭狀癌，7～8個月后有85～100%發生前胃癌。昆明種最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。

   3) 此外還可用甲基亞硝基醋酸尿素給BD大鼠飲水中加2mg/kg體重，每周5次飲用，520天后全部大鼠均發生了腺胃癌。
3．食管癌

   1) 甲基芐基亞硝胺（MBNA）誘發大鼠食管癌

取體重100g以上的Wistar大鼠，任其食用含甲基芐基亞硝胺的飲水，并將MBNA摻入飼料中使每日攝入量達0.75～1.5mg/kg體重。80～100天可誘發成食管癌。也可用二烴黃樟素（Dihydrosafrole），它是一種制備啤酒的調味品，在大鼠飼料中加入百萬分之二千五百至一萬（2500～10000ppm）黃樟素，就能引起20～75%的食管癌。

   2) 用0.2%或0.005%的甲基芐基亞硝胺水溶液，給動物經口灌喂，每天一次，大鼠灌注劑量為1mg/kg體重，至第27天即發現一例食管乳頭狀瘤，154天發現第一例食管癌，11個月食管癌的發生率為53%。
4．肺癌

   1) 二乙基亞硝胺（DEN）誘發小鼠肺癌

小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次劑量56mg/kg，DEN總劑量達到868mg，觀察時間為100天左右時，發癌率可達40%。而DEN總劑量達到1176mg，觀察時間為半年左右時；發癌率可達94%。

   2) 烏拉坦誘發肺腺癌：小鼠（A系，1～11/2月齡）較大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%烏拉坦生理鹽水液0.1～0.3ml，間隔3～5日再注，共注2～3個月，每只小鼠用量約為100mg，注后3個月肺腺癌發生率為100%，而且多數為多發性，這種誘發瘤為良性。

   3) 此外還可用氣管內注入苯并芘、硫酸銨氣溶膠、甲基膽蒽等誘發肺癌。如猴氣管內注入3，4苯并芘（苯并花為3～15mg與等量之Fe₂O₃混合液），每周一次，共10次，6只猴中有2只誘發肺的鱗狀上皮癌。亦有人用硫酸胺氣溶劑給100只大鼠吸入，13個月后所有大鼠都發生了肺腺癌。用0.2%明膠作懸浮劑將甲基膽蒽混合后給金地鼠氣管內注入，每次0.1ml（含甲基膽蒽5mg）每周一次，共6次，53周后有62.5%動物發生了肺癌。
5．鼻咽癌

   1) 二甲基膽蒽（MC）誘發大鼠鼻咽癌：取直徑2～3mm的硬質塑米管，在酒精燈上小火拉成錐形，每段長約3.5cm，管內填以結晶體MC。小管一端用火封閉，以防藥物外溢，尖端用針刺數孔，使MC能從小妃溢出。取體重120g左右的大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，由前鼻孔將上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔較小管粗端為小的特點，稍加用力，迫使小管全部進入鼻腔內，其尖部可達鼻咽腔。不需另加固定，即可使小管長期留于鼻腔內。待到預定時間（半年以上），或動物自行死亡時，到其鼻咽部，10%福爾馬林固定，脫鈣后，石蠟包埋，進行連續切片。發癌率可達60%以上。

   2) 二乙基亞硝胺滴鼻法誘發鼻咽癌：取120g左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用磨平針尖的8號針頭，從前鼻孔輕輕插入，針尖可達鼻咽腔。經注射器灌注用1%吐溫-80新配的33.3%DEN混懸液0.02ml(含DEN6.7mg)每周1次，共15～20次，可誘發成鼻咽癌。
6．宮頸癌

取雌性小白鼠，以附有0.1mgMC的棉紗線結在動物不麻醉的狀態下，借助于陰道擴張器及磨純的彎針，將線穿入宮頸。經右宮角背部穿出，使線結固定于宮頸口。線的另一端則固定于背部肌肉，縫合皮膚，掛線以后，同日開始連續注射青霉素2～3天。以防術后感染。至一定時間（半年左右）處死動物，宮頸組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，連續切片。
7．結腸癌

給四周齡的雄性大白鼠，皮下注射二甲基芐肼（Dimethlhydrazine，DMH）每周一次，連續21周，每次DMH21mg/kg。最后一次給藥后1～4周，處死動物。降結腸部位用Bouin液固定，脫水，石蠟包埋，切片。所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液，并加EDTA37mg，用氫氧化納（0.1N）液將pH調至6.5備用。