利用Prep 150 LC系統分離紫錐菊提取物中的天然產物
Jo-Ann M. Jablonski, Andrew J. Aubin 和 Wendy Harrop
沃特世公司(美國馬薩諸塞州米爾福德)
簡介
紫錐菊(又名紫松果菊)屬菊科草本開花植物，是一種能夠抵御干燥氣候的多年生植物1,2。紫錐菊花所含的其中一種主要化合物為菊苣酸，它是苯丙素和咖啡酸的衍生物3,4。最近一份有關菊苣酸的文獻檢索顯示，與此化合物相關的已發表研究文獻中，超過50%的內容都與其醫療用途相關，包括上呼吸道感染與癌癥的治療，以及提高對不同刺激物的免疫應答等等5,6,7。包括地點、生長條件和樣品處理在內的諸多因素，都會影響到不同自然產物提取物中菊苣酸的含量。如要分離出足夠量的目標化合物以便有效進行其他實驗研究，通常需要執行多次粗混合物進樣。在本研究中，我們將重點討論能否將Prep150 LC系統用作從紫錐菊提取物中分離菊苣酸的工具。Prep150 LC系統由ChromScope軟件進行控制，這是一款直觀型軟件，可幫助用戶快速實現化合物的分離。本文概述的原理同樣也適用于帶有紫外發色團的任意化合物的分離。
樣品描述
將總計5.3 g的紫錐菊粉末有機根(StarWest Botanicals，Sacramento，CA 95838)分別加入兩個50 mL的離心管內(各含2.66 g與2.64 g紫錐菊粉末)，使用20 mL 70:30的甲醇/水溶液震蕩約3 h進行提取。然后對離心管執行離心操作，取上清液，使用多個13 mmGHP Acrodisk注射器過濾器進行過濾。濃縮蒸發去除提取物中的甲醇，直至形成黃褐色膠狀物。將此膠狀物溶于14 mL 95:5的水/乙腈溶液中。
液相色譜條件
結果與討論
雖然紫錐菊提取物中含有至少四種咖啡酸衍生物，但菊苣酸仍是其中含量最高的一種化合物，菊苣酸在草藥產品中的效用主要源于其免疫增強功能8。在蒸干甲醇前，紫錐菊粗提取物的分析色譜圖表明菊苣酸是其中含量最高的化合物(圖1A)。使用快速篩選梯度時，粗提取物中的菊苣酸與相鄰譜峰之間能夠實現良好的分離。為進一步提高譜峰的分離度，實驗重點對梯度進行了研究9，并在分析柱上進行了載樣量研究。如圖1B所示，分析柱可接受的載樣量為35 μL的粗提取物進樣體積。