反相高效液相色譜（RP-HPLC）是一種基于溶質表面、極性流動相和非極性固定相之間疏水作用的色譜模型。任何有機分子的結構中都有非極性疏水部分。零件越大，一般保留值越高。它廣泛應用于高效液相色譜。在生物大分子的反相液相色譜（RP-LC）條件下，大多數流動相為酸性、低離子強度的水溶液，含有一定比例的有機改性劑，如異丙醇、乙腈或甲醇等，能溶于水。大量填料是直徑大于30納米的硅膠烷基鍵合相。此外，還有一些聚合物微球。
反相高效液相色譜柱的應用與維護
在日常分離分析工作中，正確使用和維護反相高效液相色譜柱是非常重要的。色譜柱的正確使用直接影響色譜柱的使用壽命。稍有不慎，就會降低塔效，縮短使用壽命，甚至損壞塔。在色譜運行期間，需要注意以下問題來維護色譜柱。
（1）柱在裝卸和更換時，動作應輕，接頭應適當擰緊。為了防止柱床產生空隙，必須防止強烈的機械振動。
（2）如果儀器用于常規分析，樣品種類有限，但分析次數較多，建議每種常規分析配置一個專用柱，有助于延長柱的使用壽命。
(3)避免壓力溫度的急劇變化和機械振動。塔內溫度的突然變化或塔內溫度從高位下降，都會影響塔內的填充條件。塔壓的突然升高或降低也會對填料產生沖擊。因此，在調節流量時應緩慢，在閥門噴射時，閥門的旋轉不應緩慢。
（4）應逐
逐步變化的溶劑的組成，特別是反相色譜，不應直接從有機溶劑轉變為所有的水，反之亦然。
（5）使用柱溫控制裝置時應注意通過流動相后才能升溫。
(6)一般情況下，反相高效液相色譜柱不能回流，只有生產者表示柱可以反向沖洗以將殘留在柱頭中的雜質反沖洗否則反洗會迅速降低塔效。
(7)選擇合適的移動相避免固定相位被破壞有時可以在取樣器前面連接一個預柱。分析柱與硅膠粘結時，硅膠柱為硅膠柱，在進入分析柱前能使硅膠流動相飽和，從而避免硅膠柱在分析柱中的溶解。
(8)必須對樣品進行預處理或在注射器和色譜柱之間連接保護柱，以避免將復雜的基體樣品，特別是生物樣品直接注入人體柱。保護柱通常是由類似的固定相填充的短柱保護哨所可以而且應該經常更換。
（9）色譜柱常用強溶劑清洗，以除去保留在色譜柱中的雜質。在清洗過程中，對流系統中流動相的位移應逐漸與混合溶劑過渡，每個流動相的體積應為色譜柱體積的約20倍，即需要50至75mL進行常規分析。
（10）柱內填充乙腈或甲醇，擰緊柱接頭，防止溶劑蒸發和干燥絕對禁止將緩沖液留在列中過夜或更長時間。
（11）反相高效液相色譜柱在使用過程中，如果壓力升高，可能是燒結過濾器堵塞，應更換或拆下過濾器進行清洗；另一種可能是高分子進入柱內，污染柱頭；如果柱效降低，或是色譜柱壓力升高，則可能是高分子進入柱內，污染柱頭。色譜峰變形，柱頭可能塌陷而死亡。音量增大了。
(12)分離分析工作完成后不應立即停止色譜分析系統應及時沖洗，一般在0.5h以上以除去柱中的雜質。