培養嗜酸乳桿菌的器材和詳細的方法步驟

儀器及器皿

THZ-C恒溫震蕩器,LRH-250生化培養箱,LDZX-50FB立式電熱壓力蒸汽滅

菌器,SW-CJ-1F潔凈工作臺，百分之一電子天平，生物顯微鏡， 18×150試管,90mm培養皿，500ml三角瓶，10ml刻度吸管，1ml移液槍，吸耳球，玻璃珠（直徑4-6mm），pH試紙（5.5-9.0）

試劑

氯化鈉（分析純），葡萄糖（分析純），蛋白胨（生化試劑），牛肉浸膏（生化試劑），檸檬酸銨、磷酸氫二鉀、酵母膏、乙酸鈉、硫酸鎂、硫酸錳、吐溫-80、進口瓊脂等 3．具體步驟 準備工作

1 MRS瓊脂培養基的配制及滅菌：葡萄糖20g、檸檬酸銨2g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀5g、硫酸鎂0.5g、硫酸錳0.2g、牛肉膏10g、酵母膏5g、蛋白胨10g、吐溫-80 1g、瓊脂16g、水1000mL 、pH5.5-6.0，118℃滅菌30min。

2 其他物品的包裝及滅菌：500ml三角瓶、培養皿、1ml移液槍、10ml刻度吸管、玻璃珠、18×1500試管等用牛皮紙包裹好，0.85%生理鹽水置于1000ml三角瓶和250ml三角瓶，1ml槍頭盒（內置槍頭）、滅菌器121℃30分鐘。

3 潔凈工作臺的準備：操作前將所需物品置于臺面，紫外線滅菌30分鐘再進行操作。

樣品制備

采樣應不少于500克，采用稱量紙稱取25.00克（精確到0.01g），傾入 已加入滅菌玻璃珠的干燥已滅菌500ml三角瓶中，用100ml量筒量取先100ml已滅菌的生理鹽水沿瓶壁傾入500ml三角瓶，搖勻，約2分鐘，再量取125ml已滅菌的生理鹽水沿瓶壁傾入500ml三角瓶，然后包裹起來于旋轉式搖床上200r/min充分振蕩30min，即成母液的菌懸液。 3.3 樣品處理

1　用移液槍取1ml上述母液的菌懸液加入盛有9ml無菌水的試管中，混勻成1:102稀釋的菌懸液，這樣依次稀釋，分別得到1:103、1:104……1:107等濃度（每個稀釋度必須更換無菌吸管）。

2　取1ml不同稀釋度菌懸液加入培養皿內，與瓊脂培養基混勻。每個樣品取3個連續適宜稀釋度，每一個稀釋度重復3次，同時加無菌水的空白對照。置于生化培養箱37℃培養48h，每個稀釋度取5~10個菌落的菌體，涂片染色，顯微鏡觀察識別后計數菌落。