復旦附屬中山醫院團隊發現了肝癌免疫逃逸新機制！

　　肝細胞癌（HCC）作為全球第六大常見癌癥類型，由于通常其確診時間較晚，每年會導致近83萬的死亡[1]。

　　針對晚期肝癌的治療，當前主流手段包括多激酶抑制劑索拉菲尼、侖伐替尼等的使用。隨著具有里程碑意義的IMbrave150臨床試驗結果的發表，免疫檢查點抑制劑正逐步改變晚期肝癌的治療方式[2]。

　　但是與黑色素瘤、微衛星不穩定型腫瘤相比，肝癌對免疫檢查點抑制劑響應率較低。因此，了解肝癌免疫療法的耐藥機制，以及開發針對肝癌更有效的免疫治療策略，是當前肝癌治療領域一大研究重點。

　　近日，由復旦大學附屬中山醫院史穎弘、樊嘉和劉衛仁領銜的研究團隊，在著名期刊Cell Discovery上發表重要研究成果[3]。

　　他們發現，肝癌組織中的CD36+癌相關成纖維細胞（CAFs），可以通過分泌巨噬細胞遷移抑制因子（MIF），募集CD33+髓源性抑制細胞（MDSCs），為肝癌細胞提供抑制性的免疫微環境，使之逃過免疫系統的監視。而CD36抑制劑（SSO）和PD-1抑制劑的聯合使用，可以恢復抗腫瘤T細胞反應，抑制肝癌的發展。

　　該研究揭示了HCC免疫療法耐藥新機制，為提高HCC免疫療法的治療效果提供了新思路。

　　論文首頁截圖

　　HCC腫瘤微環境的一大標志性特征是具有大量的CAFs。

　　這類細胞可以通過分泌多種細胞因子、趨化因子以及生長因子，直接或者間接的促進癌細胞的免疫逃避和腫瘤發展。許多研究已經表明，不同CAFs亞群可以通過與癌細胞相互作用，促進癌癥發展[4]。

　　但是，目前人們對HCC中CAFs的異質性，特別是單細胞層面這些細胞與癌細胞的相互作用，仍然知之甚少。

　　鑒于此，研究人員利用單細胞測序手段，對來自7位HBV相關HCC患者的腫瘤組織和鄰近正常肝組織的90572個細胞進行了轉錄組分析。根據標志基因ACTA2、COL1A1和COL1A2的表達，研究人員得到了1835個CAFs。

　　進一步聚類分析顯示，這些CAFs可以被分為5個亞群。根據這些亞群GO和KEGG富集分析的結果，研究人員將它們分別命名為：血管相關CAFs（vCAFs）、基質相關CAFs（mCAFs）、脂質代謝-基質相關CAFs（lpmCAFs）、脂質代謝相關CAFs（lpCAFs）和抗原呈遞相關CAFs（apCAFs）。

　　這些CAFs亞群在模擬人HCC遺傳背景的CTNNB1N90；Trp53KO HCC小鼠模型中也存在。

　　HCC腫瘤微環境存在多種CAFs亞型

　　為了了解不同細胞類型之間的聯系，研究人員對包括癌細胞、T細胞、B細胞、MDSCs以及CAFs等9種細胞類型，進行了配體受體互作分析。

　　結果顯示，CAFs與免疫微環境中包括MDSC等多種免疫細胞之間，都存在著由MIF和CD74/CXCR4介導的相互作用。進一步分析顯示，MIF配體主要來源于lpmCAFs和lpCAFs這兩個亞群。有意思的是，這兩個亞群都高表達CD36。

　　多重熒光免疫組化結果顯示，這些CD36+CAFs只在腫瘤組織中有浸潤，在鄰近正常肝組織中并不存在。

　　另外，單細胞數據結果顯示，CD36+CAFs的細胞豐度與MDSCs的細胞豐度呈正相關，與效應T細胞的細胞豐度呈負相關。這意味著CD36+CAFs可能具有免疫抑制作用。

　　CD36+CAFs特異性浸潤在腫瘤組織中，且其細胞豐度與抑制性的免疫微環境相關

　　為了弄清楚CD36+CAFs以及MIF在HCC發展過程中扮演的角色，研究人員分離出了小鼠HCC組織中CD36+CAFs，并比較了敲低CD36前后CAFs轉錄組和功能的變化。

　　結果顯示，敲低CD36后，該CAF亞群中MIF的表達、分泌水平下降，且脂質過氧化功能及相關基因的表達下降，對氧化低密度脂蛋白（OxLDL）的吸收能力下降。

　　進一步分析顯示，CD36+CAFs可以通過吸收OxLDL增強脂質過氧化功能，進而激活p38-CEBP信號通路，最終上調MIF的表達。

　　MIF在腫瘤微環境中的作用已有報道，包括促進免疫抑制性單核細胞樣MDSCs的富集[5]。因此，研究人員分析比較了CD36+CAFs、CD36-CAFs、CD36kdCAF的調節培養基，對MDSC增殖分化過程的影響。

　　結果顯示，CD36+CAFs調節培養基可以誘導CD33+MDSCs的擴增，效果與添加了MIF的培養基類似。而在CD36+CAFs調節培養基中添加MIF抑制劑，或者使用CD74抗體阻斷MIF-CD74相互作用，可以抑制CD33+MDSCs的擴增。

　　進一步體內實驗結果顯示，相較于肝臟原位共同注射了HCC細胞和CD36-CAFs的小鼠，共同注射了CD36+CAFs的小鼠腫瘤發展明顯加快，其微環境中CD8+效應T細胞明顯減少，而敲低CD36、使用MIF抑制劑或者使用抗體清除MDSC，均可以逆轉這些變化。這些結果說明，CD36+CAFs可以通過分泌MIF來促進MDSCs的增殖，進而營造一個利于腫瘤發展的抑制性免疫微環境。

　　CD36+CAFs來源的MIF通過促進MDSC擴增來營造抑制性的免疫微環境

　　另外，研究人員還發現，CD36+CAFs可以誘導MDSC增強腫瘤細胞的干性，并且該作用可能是通過IL-6-STAT3通路實現的。

　　CD36+CAFs在HCC的發生及對免疫療法的響應過程中同樣扮演重要角色。研究人員發現，對比正常小鼠，成纖維細胞中敲除了Cd36或者Mif基因的小鼠，在尾靜脈注射實驗中形成了更少數量的腫瘤，且具有更長的生存期。

　　而且聯合使用CD36抑制劑（SSO）和PD-1抑制劑，可以有效減少腫瘤微環境中Treg和MDSCs的豐度，增加CD8+效應T細胞豐度，控制腫瘤發展，顯著改善小鼠生存期。

　　抑制CD36/MIF能提高PD-1抑制劑的抗腫瘤效果

　　總的來看，該研究通過對HCC單細胞水平轉錄組的研究，發現了一種與免疫抑制性微環境相關的癌相關成纖維細胞亞群，并確定了其介導腫瘤細胞免疫逃避的機制。同時，該研究還提出了一種可有效提高HCC免疫抑制劑療效的輔助治療思路，即通過靶向CD36來逆轉抑制性的腫瘤免疫微環境。