大鼠MSCs的獲得和擴增實驗

(a)CO₂窒息處死動物，切勿使用藥物。

(b)用酒精擦拭后肢，在不破壞股骨的情況下解剖后肢。將股骨從肢體中分出來。

(C)切除股骨上的肌肉和肌腱。用無菌紗布擦拭除去骨上的剩余組織。

(d)用酒精擦拭已清理干凈的骨，將其放人50 ml塑料管中。

(e)用含抗真菌藥物的冰浴CCM浸沒骨，直到骨髓提取準備完畢。從分離骨到骨髓提取的時間應盡量縮短。

(f)裝有股骨的離心管移至微生物安全廚中，將骨放人15 cm petri培養皿中。

(g)按如下步驟提取骨髓：用咬骨鉗剪掉骨的兩端，暴露內部骨髓。裝有23G針頭的注射器中吸人5ml含抗真菌藥物的CCM，向50ml離心管中沖洗每根股骨。吸取沖洗后的CCM，反復沖洗股骨3次，將其轉移至15  ml離心管中。1000g離心，用1ml含抗真菌藥物的CCM重懸骨髓沉淀。在15 ml離心管中將1 ml骨髓細胞懸液加入到4  ml含抗生素和抗真菌藥物的新鮮PBSA中。每根股骨所得的5ml細胞懸液可混合于同一個離心管中。

(h)在l0℃1000g離心骨髓細胞10 min,用10ml含抗生素和抗真菌藥物的PBSA洗滌細胞3次。

(i)最后，用5 mlCCM重懸骨髓細胞，置于冰上。