小白鼠骨髓細胞染色體顯帶（C帶）技術

實驗原理

染色體顯帶（Banding）技術是一種用染料對染色體進行分化染色的方法。就是將染色體經酸、堿、溫度等處理后，再以染料染色，或單用某些熒光染料就可以染出深淺不同或明暗各異的帶紋的縱向結構。此項技術發明于本上世紀六十年代末、七十年代初，發展至今已是非常成熟。1971年在巴黎召開第四次國際人類遺傳學會議上制定了人類染色體識別的統一體制，訂出了各條染色體分帶的寬窄、位置和名稱；1981年又公布了《人類細胞遺傳學高分辨率顯帶命名國際體制》，這些規定目前為世界各國學者所普遍采用。在我國，染色體顯帶工作起步于70年代，主要以核型為主，臨床上則以染色體異常疾患為主。目前，人類染色體顯帶在一些醫院中正成為常規化驗項目之一。

染色體顯帶技術在人類和動物方面的研究取得了顯著的成果，植物染色體顯帶雖然一直落后于人類及動物染色體顯帶技術，但近些年來也取得了很大的進展，主要原因是植物染色體帶紋簡單，使得該技術在實際應用上受到限制。

顯帶技術可以分成兩大類：一類產生分布于整個染色體長度上的帶紋，如Q帶、G帶、R帶等；另一類則只能使少數特點的帶或結構染色，如C帶（使著絲粒即異染色質著色）、T帶（使染色體端粒著色）、N帶（使核仁組織區即次級縊痕著色）。

不同的顯帶技術采用的處理方法各異，經過處理使染色體的結構和組成差異表現為對染料親和性的不同。對各種不同帶型產生的機理有各種看法和推斷，目前還在進一步探索中。

由于經顯帶處理后，染色體上帶紋的數目、位置、寬窄及染色的深淺都具有相對的穩定性，具有一定的種屬特異性，所以可以將它作為一種更精細的標志，使我們能更有效地鑒別染色體，分析染色體組型，進行物種間親緣關系的鑒定，更深入地研究染色體的結構和功能。隨著顯帶技術的不斷發展完善，對細胞學、遺傳學、分類學、育種學、醫學等都有十分重要的意義。

C帶是顯帶技術中zui簡單的一種帶型。C帶的操作程序特別能使著絲粒型的異染色質著色，這種異染色質常位于著絲粒周圍并常含有高度重復的隨體DNA。因通常在著絲粒（centromere）處出現，故稱之為C帶。

關于C帶產生的機理，有一種說法認為由于異染色質部分結構緊密且主要結合組蛋白，氫氧化鋇或其他堿性物質處理時異染色質區被保護而優先提取了常染色質區即非C帶區的DNA，致使染色體臂著色淺而異染色質部分著色深，從而產生C帶。

操作中氫氧化鋇溶液處理的時間是全過程zui關鍵的一步，染色體標本在氫氧化鋇溶液中處理時間過長，會使染色體均為淺色，反之則會染為紫色，表現不出分化染色。

實驗試劑

0.2mol / L鹽酸、5%Ba(OH)2、2×SSC溶液、Giemsa染液等。

2×SSC溶液（0.3mol / L NaCL 0.03mol / L 檸檬酸鈉）：稱取NaCL117.53克和檸檬酸鈉8.8233克置于容量瓶中加至1000ml。

實驗設備

恒溫水浴鍋、立式染色缸等。

實驗材料

小白鼠骨髓細胞染色體標本。

實驗步驟

1、制片：見實驗小白鼠骨髓細胞染色體制片技術。

2、HCl處理：室溫下，將上次實驗未染色的小白鼠骨髓細胞染色體標本放入0.2mol / L鹽酸溶液中處理1小時，然后水洗。

3、Ba(OH)2處理：將標本浸于50℃的5%Ba(OH)2溶液中，處理10—30秒（隨氣溫和標本齡而變動）后，水洗。

4、2×SSC處理：將標本轉入60℃的2×SSC溶液中處理1小時，水洗。

5、染色：將標本放入Giemsa染液中染色10分鐘，水洗。

6、鏡檢：將標本干燥后用顯微鏡高倍物鏡檢查顯帶標本，選擇染色體分散均勻，顯帶明顯的分裂相。

注意事項

操作中氫氧化鋇溶液處理的時間是全過程zui關鍵的一步，染色體標本在氫氧化鋇溶液中處理時間過長，會使染色體均為淺色，反之則會染為紫色，表現不出分化染色。