(六)、操作方法
1、RBC/PLT計數
1)取5μl混合均勻血液加入100μlPBS-BSA稀釋液;
2)加5μl抗CD41和5μl抗CD61染色液,孵育15分鐘;
3)加入4.85mlPBS-BSA稀釋液,使最終稀釋度為1:1000倍;
4)計數最少50000個細胞,至少1000個血小板。流速設置小于3000 /秒。若出現紅細胞散射光信號,而又有血小板熒光,應考慮RBC-PLT重合誤差可能。
采用Quadrant或Bitmap軟件分析,推薦采用Bitmap軟件分析。
2、RBC值測定
采用ICSH推薦半自動、單通道、電阻抗顆粒計數儀法計數紅細胞。
(七)、血小板計數計算
根據流式細胞儀計數結果,可得出RBC/PLT比率(R)。
R=RBC/PLT;
PLT計數值=RBC計數值/R。
如RBC計數值= ;
PLT計數值= 。
實驗研究表明,在357名健康人(包括不同性別和人種),R值為21.572 ±5.134。
(八)、重合誤差
一旦試驗設定最佳條件,就無需考慮重合誤差。但是,在設置過程中,應考慮稀釋 、流速等方面因素是否達到監測重合誤差可能。
(九)、不精密度
標本中細胞數量決定了統計學計數的變異程度。其中Nplt為流式細胞儀計數的血小板數,Nrbc為流式細胞儀計數的紅細胞數;由于流式細胞儀計數的紅細胞數相當于總流式細 胞儀計數值(Ntotal),而Nplt=Nrbc/R,所以,按照上述研究表明,R平均值為20左右,Ntotal為50000,流式細胞 儀計數血小板的統計學精度就可達2%左右。實驗同樣也證明,血小板計數為 ,方法學精度為1.7-3%。
(十)、干擾
雖然單克隆抗體標記方法在大部分標本中是有效的,但也會產生干擾。
(十一)、評價
經法國、英國、美國、日本等11個實驗室運用抗CD41和抗CD61染色方法 對血小板計數研究顯示,該方法的實驗室內精度和實驗室間精度很好。該法可以替代原來顆粒計數法,適用于自動血液分析儀的校準,尤 其是血小板計數減少標本,測定結果的準確性很高。
二、血液學質量保證
對于臨床實驗室來說,其提供服務有3個目的:(1)實驗室檢查結果必須準確; (2)所進行實驗對疾病診斷、療效觀察、普查或流行病學研究有價值;(3)實驗室必須快速、有效、經濟的提供結果。為了達到上述 目標,實驗室從管理者到操作人員的工作都必須納入質量保證體系中。
血液學實驗室的質量保證計劃由4部分組成,(1)內部質量控制;(2)外部質 量評價;(3)分析前和分析后控制和(4)標準化問題。