| 注意事項 | （1）在我們進行 CBMN 實驗過程中，最容易產生問題的是在玻片的制備和染色環節 ，因為計數結果的好壞依賴于制片的質量。主要注意事項：（a） 在將細胞置于玻片前應輕輕吹打，避免細胞結塊； （2）要做重復以確保結果可信，同時也可計算組內重復標準差數據。細胞遺傳毒性實驗需要滿足嚴格的數據分析標準，如 果 C V 值大 于 1 0 % 就應剔出。由于是肉眼計數觀察實驗，較大的標準差是可以接受的。根據我們的經驗和國際實驗室間計數比較的結果，基線數據 C V s 大于 4 0 % ，則不能接受；對于暴露于放射條件下培養，每 1000 個 BN 細胞中有大于 100 個 M N 時， C V s 應小于 2 0 % 。 （3）不熟練操作者（如學生和新技術員）的計數不可靠，除非他們在計數標準對照玻片時 C V 值達到可被接受的程度（不大于 40% ) 。 （4）不同計數人員間的差異是造成 M N 實驗差異的主要原因之一 （71)。此，在一項研究中使用同一個技術員是很有必要的，最好有兩名技術員，用如 圖 2 所示的同樣方法對重復組進行計數。另一方法是用有「低」、「中」、「高」 M N 頻率的標準片對計數員進行校正。每一個計數員對標準玻片的計數可被用來計算一個校正值。這種方法雖然仍在完善中，但由于它考慮了在同一個實驗室或實驗室之 間計數員的視覺差異，從而也是值得重視的。 （5） 另一造成計數員和實驗室間差異的重要影響因素是顯微鏡的質量和鏡頭。根據我們的經驗，統計核質橋受到顯微鏡的影響，因為細小的核質橋會被質量較差的鏡頭忽 略。需要注意的是計數員應避免在實驗中變換顯微鏡，并且實驗室負責人應統一顯微鏡的鏡頭，并將其升級至一個較高的水平。我們推薦使用可以提供優質清晰度、 圖像對比度和平整度的系統。系統應有放大 1000 倍的能力。 （6）常見問題之一是確定在 CBMN 實驗中 BN 細胞的數量。雖然記數從 500 到 2000個 BN 細胞都有過報道，被認可的做法是每次處理或時間點計數不少于 1000 個BN 細胞。另一種方法是計算 B N 細胞數直到出現固定數量的微核（例 如 4 5 個微核)。后者的優點是當 MNi 數量較少時需要較多的 BN 細胞，這樣能在不同處理之間保持統計效力。缺點是當 M N 頻率較低時可能需要計數超過 2000 個細胞。我們的實驗顯示每個重復統計 1000 個 BN 細胞可以得到可信結果。 （7）在觀察玻片時首先計數單核細胞、雙核、多核、凋亡和壞死細胞頻率來確定 ND1 和NDCI。 然后計算雙核細胞中的微核、核質橋和核芽數量以確定遺傳損傷的比例。 |
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