原代培養細胞，關鍵是消化，我一般酶液是新配的，要足量啊（又一次還剩三排的時候，一同學把酶液碰到水浴鍋，害的我借得酶液，耽誤了時間，而且組間數據紊亂，最后浪費細胞和染料，大家要注意保護好酶液啊），這樣每次心理都有底，而且放入水浴37度30min，甚至扔到培養箱（不建議采用）升溫。
消化前，用溫PBS輕洗細胞，一次，然后開始消化，24孔板加400ul酶液（0.25%胰酶和0.02%edta，如果你的edta不好，那么配好就用0.22或0.45um膜過濾），先鏡下觀察，放入培養箱10s，后再看，一般夠了，不過正常組可能需要20-30s。然后我就輕拍手，幫助消化，鏡下看細胞，飄起70%-80%，每孔加10%FBS培養基終止消化，輕吹打，孔四周和中間（俺的細胞就是中間多）。吸入流式管。
離心1000轉7min，其實要根據離心機質量來考慮，如果進口的就用這個設置，國產的啟動和降速太慢，而且轉速不確定。小心果斷干脆快速的倒上清，加已經按1：4稀釋的AV5ul（省染料）和10ulPI，避光溫度稍低些，現在天熱了，15min，加buffer400ul，上樣。
成年心肌上樣前的狀態是關鍵，就是剛分下來和處理的一段時間。所以PI肯定很多，而且離心要科學，不要用PBS，雖然是緩沖液，至少要調PH值，如果做與鈣無關的實驗，可以試一試無鈣的胞外液，kb液是非正常生理液，
AV可以先用buffer稀釋1/4使用，否則太浪費。上樣最好緊接染色之后。
染料是傷細胞的，尤其對于急性分離的心肌細胞，離心后棄上清也是有技巧的，否則上清留下來，要么細胞丟失。