懸浮培養細胞生長曲線的繪制實驗

材料

無菌

懸浮細胞培養
培養液，l00 ml
D-PBSA(細胞計數用）
24 孔板

非無菌

裝培養板的塑料盒
CO₂ 溫箱或 5% C0₂ 以充盈塑料盒

操作步驟

1. 如單層培養那樣（見方案 21.8 ) 將生長液中的細胞懸液以不同濃度加人到孔中。

2 . 以不同時間從三孔中取樣 0.4 ml，注意細胞要充滿混勻以及完全分散成單個。

3. 用電子細胞計數器汁數（見 21.1.2 節）或用血球計數器計數（見 21.1.1 節)。

4 . 計算每個樣本的細胞濃度，像單層細胞生長一樣以時間作對數線性作圖（見 21.9.3 節）。細胞密度不適用于懸浮培養，因為它們不會貼附。

提示 接種 2 個 75 cm² 培養瓶，每瓶 20 ml 不同農度的細胞懸液。按需要每天從瓶中取 0.4 ml，但取樣前要混勻細胞。培養瓶離開溫箱的時間要盡量短，在畫生長曲線期間不要換培 養液。或者將培養瓶裝在振蕩器上（Techne，Integra，BeHco)，每天取樣。如果用振蕩培養瓶在一側瓶口封膜，則不用從溫室中取出培養瓶， 也不用打開封口膜就可以取樣，將膜面擦凈，顛倒一下瓶子用注射器就可將液體吸出。