提取細胞質和細胞核蛋白的操作步驟

在細胞實驗中提取細胞質和細胞核蛋白的操作步驟：

1.決定細胞生長狀態，細胞生長狀態應該是80%或者更好；

2.用離心機以1500r/min離心5min；

3.棄上清液，用等體積的冷PBS洗細胞，像步驟2那樣，反復3次；

4.根據估計的沉淀量加入5倍體積的isotonic lysis buffer到細胞顆粒中，使細胞溫和懸浮，盡量避免泡沫；

5.加入裂解液lysis buffer在懸浮的細胞中，并放在冰上15min讓細胞膨脹，可以通過顯微鏡檢查；

6.對于細胞實驗中膨脹的細胞，加入10%的IGEPAL CA-630使*后的濃度達到0.3%，混勻，加的時候要溫和；

7. 立即離心（量大的可以用1.5mlde EP管，以5500r/min離心30s；量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min）；

8.轉移上清液（細胞質蛋白）到一個新的冷凍管中；

9.用懸浮顆粒5倍體積的isotonic lysis buffer懸浮細胞，并混勻；

10.用離心機離心細胞懸浮液，以1500r/min離心5min，移掉上清液；

11.用2/3倍體積的extraction buffer懸浮顆粒；

12.把管子放置在震蕩混勻器上，以700r/min，15min震蕩混勻，接著以1400r/min,15min,整個過程要仔細，避免泡沫產生；

13.以9400r/min離心15min，離心完后轉移上清液到一個新的冷凍離心管中；

14.分成幾份用液氮冷凍，并且保存起來（長期保存應放在-80℃上，短期保存要放在-20℃上）。