五 、 氣道反應性的檢測
實驗第 32 天 , 首先 , 連接好 B u xco 無創肺功能儀并定標 。將自然狀態下的 BALB/ c 小鼠置入體描箱中 ,先測定基礎 Pe n h 值 ; 隨后用 Mc h 激發 , 濃度由低到高依次為 0 、 0 . 20 、 0 . 39 、 0 . 78 、 1 . 56 、 3 . 12 、 6 . 25 、12 . 5 、 25 和 50 g/ L ,記錄此時的 Pe n h 值 ,每次霧化吸入 2 mi n ,記錄3 mi n 。 有創組則是將小鼠行氣管插管后用 B u xco 有創肺功能儀測定其 RL 值 。
六 、 氣道炎癥
氣道反應性檢測后行支氣管肺泡灌洗 ( PB S 0 . 8 ml × 3 次) , 回收支氣管肺泡灌洗液 , 離心 , 細胞沉淀重懸 ,取部分計算細胞總數 ,余下部分制備涂片 , H E 染色后行細胞分類計數 , 每張涂片計數 400 個細胞 , 記錄各種細胞數目。
七 、 統計學處理
實驗結果以 ? x ±s 表示 ,為進行無創組和有創組氣道反應性相關分析 , 分別將每個 Mc h 激發濃度下的Pe n h 與 RL 組轉換為與 N S 激發的基礎值的百分比 ( Mc h 激發的 Pe n h 值或 RL 值/ N S 激發的 Pe n h 值或 RL值 × 100 %) 來表示 。 采用 SPSS 11 . 0統計軟件分析 ,兩組樣本均數進行 t 檢驗或相關分析 , P < 0 . 05 、P <0 . 01表示差異有統計學意義 。
結 果
一 、 小鼠的氣道反應性
小鼠在各濃度級 Mc h 激發下 ,各組 RL 變化各異 ,具體見表 1 。Penh 升為基礎水平 2 倍時的 Mch 濃度定為 PC 100 。 無創哮喘組 PC 100 均 ≤ 6. 25 g/ L ,對照組 PC 100 均 ≥ 12. 5 g/ L 。 具體分布見表 2 。無創哮喘組 Lo g2( 10 PC100 ) 值 ( 5 . 36 ± 0 . 84) 顯著低于對照組 ( 7 . 97 ± 0 . 82) ( P < 0 . 01) 。
表 1 各濃度級 Mch 激發下各組的平均氣道阻力
組別
Mch ( g/ L)
基線 生理鹽水 0 . 20 0 . 39 0 . 78 1 . 56 3 . 12 6 . 25 12 . 50 25 . 00 50 . 00
無創對照組 0 . 48 0 . 45 0 . 46 0 . 49 0 . 45 0 . 52 0 . 52 0 . 54 0 . 77 1 . 39 2 . 03
無創哮喘組 0 . 45 0 . 46 0 . 52 0 . 49 0 . 52 0 . 65 0 . 96 1 . 38 2 . 41 3 . 90 5 . 25
有創對照組 1 . 57 1 . 61 1 . 68 1 . 85 2 . 21 2 . 41 2 . 61 3 . 22 4 . 07 5 . 05 6 . 81
有創哮喘組 1 . 78 1 . 84 2 . 05 3 . 12 3 . 90 4 . 14 5 . 14 5 . 85 7 . 10 8 . 83 11 . 01
注 : Mch : 乙酰甲膽堿
表 2 無創哮喘組和無創對照組 PC100 分布
組別
PC100 ( g/ L)
0 . 00 0 . 20 0 . 39 0 . 78 1 . 56 3 . 12 6 . 25 12 . 50 25 . 00 50 . 00
無創哮喘組 ★★ ★★ ★★★★★★
無創對照組 ★★★ ★★★ ★★
注 : “★ ” 個數表示 PC100 分布數目
用無創方法測得的小鼠氣道反應性如圖 2 所示 ,其氣道反應性是以小鼠在 NS 激發下的 Penh 值為基準 ,取其他各個濃度級 Mch 激發下的 Penh 值與其百分比來反映。 對于用有創方法測得的 R L 值也是用類似的方法轉換成比值來表示。 兩種方法(無創與有創) 分別測定的模型組與對照組的氣道高反應性結果見圖 2 、 圖 3 。 將無創哮喘組和有創哮喘組的氣道反應性相應值行兩樣本的 t 檢驗 ,得 P > 0. 05 。
