配制方法：0.1 g/mL NaOH（甲液）和0.05 g/mL CuSO4（乙液）。甲液配制方法是將50g氫氧化鈉和137g酒石酸鉀鈉溶于500 mL蒸餾水中（貯于帶橡皮塞的瓶中）。乙液配制方法是將34.5g結晶硫酸銅溶于500mL水中，加0.5 mL硫酸。混合均勻。
斐林試劑的使用方法：一般將斐林試劑甲液和乙液等體積混合（或在2 mL甲液中滴4～5滴乙液），再將混合后的斐林試劑倒入待測液，水浴加熱或直接加熱（高中人教版生物必修一中為60℃水浴加熱）。如待測液中存在還原糖，則呈現磚紅色沉淀；如待測液中不存在還原糖，則仍然呈藍色。