根據大小分離RNA:乙二醛化RNA的瓊脂糖凝膠電泳

RNA 樣品 RNA 大小標準參照物

BFTE 電泳緩沖液 DMSO 乙二醇 乙二醇反應混合物 RNA 凝膠上樣緩沖液

瓊脂糖凝膠 水平電泳裝置 透明尺 水浴

一、材料

1. 緩沖液和溶液

10X BFTE 電泳緩沖液

DMSO

乙二醇

乙二醇反應混合物

RNA 凝膠上樣緩沖液

2. 凝膠

瓊脂糖凝膠

3. 核酸和寡核苷

RNA 樣品

RNA 大小標準參照物

4. 專用裝置

水平電泳裝置

透明尺

預置到 55℃ 的水浴

二、方法

1. 配制乙二醛變性反應液。在無菌離心管中混合：

RNA（總共 10 μg） 1~2 μl，乙二醇反應緩沖液 10 μl。

2. 蓋上離心管的蓋子，將 RNA 溶液在 55℃ 放置 60 min, 在冰水中冰浴 10 min, 然后離心 5s，使所有液體沉到離心管底部。

3. 在樣品加熱過程中，將瓊脂糖凝膠裝到水平電泳儀的盒子中。加入足夠的 1X BPTE 電泳緩沖液，使其沒過凝膠約 1 mmol/L。

4. 將 1~2 μl RNA 上樣緩沖液加到乙二醛化的 RNA 樣品中，然后馬上把 RNA 樣品加到凝膠加樣孔中，留著兩邊最外面的兩個孔不要加樣。將 RNA 相對分子質標準參照物加到最外面的孔中。

5. 以 5 V/cm 的電壓進行電泳，直到溴酚藍遷移大約 8 cm。

6. 將凝膠放在保鮮膜上，在紫外燈下觀察 RNA。把透明尺和凝膠對齊，在紫外燈下拍照。

7. 在照片上量出從加樣孔到各 RNA 條帶的距離。以 RNA 片斷大小的對數（log₁₀）值對遷移的距離作圖。用得到的曲線計算點雜交檢測到的 RNA 的大小。

8. 用上行或下行毛細管轉移法把 RNA 固定在固體支持物上。