檢測分析過程：色譜柱異常分析以及緩沖鹽的正確使用

　　在利用色譜檢測物質時常常需要使用緩沖鹽來調節流動相的pH值，緩沖鹽的不當使用對色譜柱可能造成柱壓升高、柱效下降以及使化合物的保留時間發生變化等影響：

　　1)柱壓升高;

　　原因：緩沖鹽使用不當導致緩沖鹽析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙，阻礙流動相傳質，引起柱壓升高.

　　2)相同化合物的保留時間發生變化;

　　原因：如果沒有沖洗干凈就進行進樣，色譜柱內含有的鹽會使化合物的保留時間發生變化.

　　3)柱效下降;

　　原因：i)有些緩沖鹽會滲入到鍵合相的深處，損害硅膠基體，導致色譜柱鍵合相流失，柱床變松，柱效下降;ii)凝結在鍵合相表面，使C18碳鏈難以舒展，對物質的保留能力下降，導致柱效下降。因此用過緩沖鹽后需要對色譜柱進行沖洗，水中緩沖鹽濃度較大時應特別引起注意。

　　如何正確使用緩沖鹽

　　1.使用前的處理:在使用緩沖鹽作流動相之前需要用不含緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱，直至基線平穩。原則上，用于沖洗的流動相與分析時所用的流動相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于沖洗用的流動相中不含緩沖鹽。理由：緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動相的水為飽和的緩沖鹽溶液時)流動相進行分析時，如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動相中含水的比例相對較小，不先沖洗掉，接下來做樣品的時候所用的流動相中如果有機溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時，緩沖鹽將會在色譜柱柱體上析出，沉積下來，這將可能導致上述對色譜柱的損害.

　　2.使用后的處理：用與分析時含水比例相同的流動相(與分析用流動相唯一的區別是，用于沖洗的流動相不含緩沖鹽)進行沖洗約30min，直至基線平穩。如果該色譜柱在接下來很長的一段時間內不使用，要長期保存，則需再加上一步，即用純的有機溶劑沖洗一遍，直至基線平穩。

　　用與分析時含水比例相同的流動相(與分析用流動相唯一的區別是，用于沖洗的流動相不含緩沖鹽)進行沖洗約30min，直至基線平穩。如果該色譜柱在接下來很長的一段時間內不使用，要長期保存，則需再加上一步，即用純的有機溶劑沖洗一遍，直至基線平穩.緩沖液可以提供離子平衡的反離子，并使流動相保持一定的離子強度和ph值，減少拖尾。

　　色譜柱異常及解決辦法

　　柱壓與硅膠基質的形態(如無定形或球形硅膠)、顆粒大小、填料合成條件、裝柱條件、所用流動相和分析時的溫度有關。不同廠家的色譜柱柱壓會有所差別，相同流動相和溫度的條件下，不同廠家的新色譜柱有的柱壓可能相差4、5個MPa，特別是低端和高端色譜柱之間，這一區別比較明顯。這是由色譜柱廠家所選用的硅膠基質及其生產條件決定的，這種差異的存在是正常的。同時需要說明的一點是，柱壓與柱效有一定的關系，通常柱效高的色譜柱柱壓相對而言會高一點，但柱壓高的色譜柱并不一定就具有高柱效。在色譜柱的使用過程中柱壓通常會出現兩種升高的形式：第一種是，隨著使用時間的延長色譜柱柱壓慢慢上升，這是正常的;

　　第二種是，使用過程中(流動相和溫度沒有改變的條件下)色譜柱壓力突然升高很多。這種壓力突然升高的現象，通常是由工作人員操作不當引起的，

　　原因：1)樣品太臟，使用前沒有過濾，導致柱篩板堵塞. 2)樣品含有的雜質在流動相中的溶解性不是很好，與流動相混合后析出，導致柱塞板堵塞。3)使用緩沖鹽，處理錯誤，緩沖鹽在色譜柱中析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙。

　　解決辦法：對于第二種，即柱壓突然升高的情況，通常有以下幾種解決辦法：

　　1)將色譜柱反接，用含水比例較大的流動相進行沖洗，沖洗時點。

　　2)色譜柱進樣一端的篩板取下，分別放在水中和甲醇中超聲或更換新的柱篩板。如果柱效沒變，但柱壓仍然較高，則應考慮進樣端填料受污染的問題，因此除了取下進樣端篩板超聲外，還需要挖掉進樣端的部分填料，挖去填料之前先檢查一下填料的顏色，如果填料的顏色發生了變化，則應該挖掉直到見到白色的填料為止。

　　挖掉后色譜柱將出現一個缺口，填補缺口的填料可以從另一支相同品牌、相同型號的報廢色譜柱的出口端獲得，填料用有機溶劑如甲醇等調成糊狀裝入缺口處，壓緊刮平，再裝上篩板.高效液相色譜系統中氣泡對檢測的影響及其解決方法在我們進行液相色譜分析時，有時會遇到這樣一個問題：系統的流路中存在氣泡.由于氣泡的存在，會造成色譜圖上出現尖銳的噪聲峰，嚴重時會造成分析靈敏度下降;氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩定，使基線起伏.造成上述現象的主要原因有三條：一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡;二是系統開始工作時未能將流路中的空氣驅趕干凈;三是在注入樣品時不注意混入了空氣.為了避免這類問題的出現，液相色譜實際分析過程中必須重視對流動相進行脫氣處理.