植物缺水程度的測定實驗

實驗方法原理 當植物缺水時體內的脯氨酸含量增加。植物體內脯氨酸含量在一定程度上反映了植物體內的水分情況，因而可以作為植物缺水情況的參考性生理指標。

用人造沸石(Permutit)在pH1-7范圍內振蕩溶液可除去干擾的氨基酸或使其不與茚三酮反應（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、纈氨酸、胱氨酸、苯柄氨酸、精氨酸等），脯氨酸與茚三酮試劑呈顯色反應，其含量與顏色的深淺呈正相關，可用分光度計測定。該法有專一性。

儀器、耗材 721分光光度計水浴鍋離心機移液管燒杯容量瓶研缽冰醋酸具塞試管脯氨酸80%乙醇茚三酮試劑

實驗步驟

二、儀器藥品

（1）721分光光度計；（2）水浴鍋；（3）離心機；（4）移液管；（5）燒杯；（6）容量瓶；（7）研缽；（8）冰醋酸；（9）具塞試管；（10）脯氨酸；（11）80%乙醇；（12）茚三酮試劑：將2.5g茚三酮溶于60ml冰醋酸和40ml 6M磷酸中，加熱（70℃）溶解，試劑至少在24小時內穩定。

三、實驗步驟

1. 繪制標準曲線

取脯氨酸溶于80%乙醇中，然后稀釋成下列濃度：0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15、20、25、30μg/ml。分別取標準溶液2ml，冰醋酸2ml，茚三酮試劑2ml加入試管中，用橡皮塞塞緊，于沸水浴中加熱15分鐘。用分光光度計于波長515nm下進行比色測定，以濃度0為空白對照。將測定結果以脯氨酸濃度為橫坐標，以光密度為縱坐標作標準曲線。

2. 植株樣品液的提取

選取植株功能葉片2g，用3ml 80%乙醇研磨（放少許石英砂），成漿狀，用80%乙醇洗研缽，將提取物和洗液置于試管中，80%乙醇總量為10ml。加蓋置于黑暗中室溫下提取24小時或水浴。

將提取液在放有活性炭的濾紙上進行過濾，重復過濾一次，除去色素和殘渣。將提取液置于試管中，加其重1/5的人造沸石強烈振蕩5分鐘。將上層液在離心機上離心10分鐘，取上清液備用。

3. 樣品溶液的測定

將離心后所得上清液，取2ml置于試管中，再加入2ml冰醋酸和2ml茚三酮試劑，加蓋密封，在沸水浴上加熱15分鐘。用3ml 80%乙醇代替樣品液作對照。在分光光度計上用515nm進行比色測定。讀出光密度后，從坐標曲線上求出樣品溶液中脯氨酸含量。