三 雙向擴散
【 實驗原理 】
雙向免疫擴散是指抗原和抗體在同一凝膠內部擴散，彼此相遇后形成特
異性的沉淀線。該反應是將抗原和抗體加入同一凝膠中兩個相隔一定間距的小孔內，使兩者進行相互擴散。當抗原和抗體濃度之比相適宜時，彼此相遇形成一白色弧型沉淀線。
【 實驗材料 】
1% 瓊脂糖，玻片或培養皿，凝膠打孔器（直徑 3mm ），水浴箱， 10ml
吸管， 5 μ l 微量加樣器，抗原，抗體。
【 實驗方法 】
1 ）取一張玻璃片，用水沖洗干凈，再用少量 75% 乙醇沖洗，晾干后置于水平臺備用。
2 ）將 1% 瓊脂糖融化， 56 ℃水浴中保溫。
3 ）將 1% 凝膠約 3ml 鋪于玻片上，待凝固后打孔，直徑 3mm ，間距 10mm 。（如圖所示）
4 ）中心孔加 5 μ l 抗體，周圍孔內每孔加 5 μ l 抗原樣品（抗原抗體均需預先做系列稀釋以獲得適宜的抗原抗體比例）。
5 ）將凝膠板置于濕盒，室溫過夜（ 24h 以上）后觀察結果。
【 結果分析 】
1 ）陽性結果為在抗原孔與抗體孔之間出現沉淀線。若出現幾條沉淀線表明抗原與抗體均不是單一組分。
2 ）此法可用來比較兩個抗原的相關性。當兩種抗原的決定簇完全相同時，則與抗體形成的沉淀線相吻合；若兩抗原的決定簇完全不同時，則與抗體形成的沉淀線呈不相關的交叉線；若兩種抗原有部分決定簇相同時，則與抗體形成呈部分交叉的沉淀線。
四 火箭電泳
將抗原抗體反應置于一定的電場中進行，能使抗原抗體反應更加快速，靈敏。根據方法的不同，主要有火箭電泳，對流免疫電泳，交叉免疫電泳等。
【 實驗原理 】
火箭電泳是把單向擴散技術與電泳技術結合起來。抗原在含有抗體的瓊
脂糖凝膠中電泳時，在電場的作用下，抗原向一個方向移動并逐步與凝膠中的相應抗體結合形成沉淀峰。沉淀峰的高度與抗原的濃度成正比。
【 實驗材料 】
1% 瓊脂糖，玻片或培養皿，凝膠打孔器（直徑 3mm ），水浴箱， 10ml
吸管， 5 μ l 微量加樣器，已知抗體，標準抗原，待測抗原，電泳儀。
【 實驗方法 】
1 ）取一張玻璃片，用水沖洗干凈，再用少量 75% 乙醇沖洗，晾干后置于水
平臺備用。
2 ）將 1% 瓊脂糖融化， 56 ℃水浴中保溫
3 ）取 15ml 瓊脂糖加到 56 ℃預熱的玻璃管中，加入適量的抗體（約 200ml ）
充分混勻后平鋪于玻璃片上。
4 ）待凝膠凝固后打孔（直徑 3mm ）
5 ）將系列稀釋的標準抗原和待檢抗原分別加到凝膠孔中，每孔 5 μ l
6 ）在 35v/cm 電場中電泳 30min 。
7 ）根據標準稀釋抗原的峰高繪制標準曲線，計算待檢樣品的抗原含量。
【 結果分析 】
1 ）本實驗主要用于抗原的測定（只能測定μ g/ml 以上的含量）。計算方法同單向擴散，均需先根據系列稀釋的標準抗原的峰高作出標準曲線，然后在標準曲線上找出待檢抗原對應的濃度。
2 ）可用于檢測血清免疫球蛋白或分泌型 IgA 及補體 C3 等的含量。
3 ）一般來說，抗原應放在負極的一側，因為多數蛋白性抗原在堿性電泳緩沖液中帶負電，在電場中向陽極運動。