一. 目的
了解3,5-二硝基水楊酸比色法測定糖的原理
掌握總糖定量測定的操作方法
二. 原理
還原糖是指含自由醛基或酮基的單糖（如葡萄糖）和某些具有還原性的雙糖（如麥芽糖）。
它們在堿性條件下，可變成非常活潑的烯二醇。遇氧化劑時，具有還原能力，烯二醇本身則被氧化成糖酸及其他產物。
黃色的3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑與還原糖在堿性條件下共熱后，自身被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內，反應液里棕紅色的深淺與還原糖的含量成正比，在波長為540nm處測定溶液的吸光度，查對標準曲線并計算，便可求得樣品中還原糖的含量。
對于非還原性的雙糖（如蔗糖）以及還原性很小的多糖（如淀粉），應先用酸水解法將它們徹底水解成單糖。再借助于測定還原糖的方法，可推算出總糖的含量。由于多糖水解時，在每個單糖殘基上加了一分子水，因而在計算時，須扣除加入的水量，當樣品里多糖含量遠大于單糖含量時，則比色測定所得總糖含量應乘以折算系數（1-
= 0.9），即得比較接近實際的樣品中總糖含量。
三 實驗材料及設備
1. 材料
面粉
2. 儀器
分光光度計 電子天平 沸水浴
3. 器材
刻度試管： 25mL×8
容 量 瓶： 100mL×2
錐 形 瓶： 100mL×1
移 液 管： 1mL×2 2mL×2 10mL×2
燒 杯： 250mL×1 50mL×1
滴 管： 2
洗 耳 球： 2
濾 紙： f11cm
坐 標 紙
漏斗、洗瓶、白瓷板、試管架、移液管架、試管夾、玻棒：各1四. 試劑的配制
1. 葡萄糖標準液（1mg/mL）
預先將分析純葡萄糖置80℃烘箱內約12小時。準確稱取500mg葡萄糖于燒杯中，用蒸餾水溶解后，移至500mL容量瓶中，定容，搖勻（冰箱中4℃保存期約一星期）。若該溶液發生混濁和出現絮狀物現象，則應棄之，重新配制。
2. 3,5- 二硝基水楊酸試劑（DNS試劑）
將5.0g 3,5-二硝基水楊酸溶于200mL 2N NaOH溶液中（不適宜用高溫促溶），接著加入 500mL含130g酒石酸鉀鈉的溶液，混勻。再加入5g結晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解后，定容至1000mL。暗處保存備用。
3. 碘液
稱取5g碘和10g碘化鉀，溶于100mL水中。
4. 酚酞指示劑
稱取0.1g酚酞，溶于250mL 70%（V/V）的乙醇中。
5. HCl溶液（6N）
取500mL12NHCl，用水稀釋至1000mL。
6. NaOH溶液（6N）
取240gNaOH，加水溶解，定容至1000mL。
五. 操作步驟
1. 樣品中總糖的提取
(1) 取材：稱取0.7g面粉，準確記錄實際質量（W），放入100mL錐形瓶中。
(2) 溶解：先用幾滴蒸餾水調成糊狀；加入15mL蒸餾水；再加入10mL 6N HCl，攪勻。
(3) 水解：置于沸水浴中水解30分鐘。用玻璃棒取一滴水解液于白瓷板中，加1滴碘液，檢查淀粉水解程度。如顯藍色，表明未水解完全，應繼續水解。如已水解完全，則不顯藍色，可以取出沸水浴中的錐形瓶，冷卻。
(4) 中和：加1滴酚酞指示劑，加入10mL 6N NaOH中和至微紅色。
(5) 定容：將溶液轉移至100mL容量瓶（B1）中，定容。
(6) 過濾：用濾紙過濾。（注意，濾紙不能用蒸餾水濕潤。）
(7) 稀釋：精確吸取濾液10mL，移入另一個100mL容量瓶（B2）中，定容。（B2）液作為總糖待測液備用。
2. 標準曲線制作及樣品測定
取8支25mL刻度試管，按下表所示順序操作。
六. 結果處理
1. 由0～5號管的數據，以葡萄糖含量(mg)為橫坐標，A540為縱坐標，在坐標紙上繪制標準曲線；
2. 求兩個樣品管A540的平均值；
3. 由從標準曲線中求樣品管中葡萄糖的含量(mg)；
4. 計算你所取的生物材料中總糖的百分含量。