1 線性范圍和檢測線 比濁法線性范圍相對較窄,當反應體系中酶終濃度在0.1~0.25U /ml較窄的范圍內具有較好的線性,相關系數在99%左右,而6-甘氨酸法中酶濃度在1.25~20μg/ml范圍內都具有較好的相關性,相關系數可達99%,比色法反應體系中酶的終濃度范圍可在0.2~1.0U /ml,相關系數可達99%,明顯優于比濁法,同時,檢測下限又明顯優于6-甘氨酸法。
2 反應時間 比濁法的反應時間為10min,是3種方法中最短的。6-甘氨酸法所需的反應時間最少60min,加之顯色時間需20min,整個檢測時間相對較長,而比色法的反應時間為20min,之后的離心時間約10min,整個檢測時間相對較短。
3 檢測用底物及其制備方法 在比濁法檢測中使用的底物為金黃色葡萄球菌菌體細胞,雖然制備簡單,但使用周期短,不易保存,穩定性較差,且存在一定的生物安全隱患,6-甘氨酸法的的底物使用的是乙酰化的6-甘氨酸肽,所制備的母液需平衡8w,作為正式使用的底物則仍需要在使用前至少平衡4w,整個制備過程復雜且漫長,而比色法的底物則采用金黃色葡萄球菌死菌體進行一系列簡單處理后,得到肽聚糖組分,再用活性染料進行染色,整個制備周期為一星期,并可進行大批量的制備,制備好的底物可以于4℃長期保存放置,使用周期長,穩定性好,安全性高。
4 重復性 由于比濁法中菌體生長不易控制,及底物菌體的活力偏差較大,直接影響測定的結果,在檢測時需盡可能保持每次測定時所用菌體活力的一致,且菌體濁度只有在0.25~0.3時才具有較好的重復性,而6-甘氨酸法則需要在較低的底物濃度下進行,為保證良好的重復性,必須嚴格控制好底物濃度,在比色法中底物是過量的,相對于比濁法,由于是死菌體制備的,不存在明顯的偏差,使檢測過程更容易控制,重復性更好。
綜上所述,色源底物比色法從底物制備的方法簡易程度、酶活性檢測時間的長短、檢測數據的重復性及精密性,均顯示其作為溶菌葡萄球菌酶的活性檢測方法具有明顯優勢。
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