由NAD+在激酶催化下接受ATP的γ-磷酸基團而得到。
植物葉綠體中，光合作用光反應電子鏈的最后一步以NADP+為原料，經鐵氧還蛋白-NADP+還原酶的催化而產生NADPH。產生的NADPH接下來在暗反應中被用于二氧化碳的同化。
對于動物來說，磷酸戊糖途徑的氧化相是細胞中NADPH的主要來源，由它可以產生60%的所需NADPH（又稱[H]）。
