用于LCM的片子的HE染色實驗

乙醇曙紅Y梅耶蘇木精超純水二甲苯

圓錐管鑷子破璃染缸

一、材料

1.緩沖液、溶液和試劑

100%乙醇

70%乙醇

曙紅Y(Sigma)

梅耶蘇木精（Sigma)

DEPC處理的超純水(BiotecxLaboratories，儲存于4°C)

二甲苯(Sigma)

2.特殊設備

圓錐管，50ml

鑷子

破璃染缸（用于二甲苯的盛放）

3.細胞和組織

來自方案1的片子

二、方法

染色應盡可能和LCM操作之間安排緊湊，尤其是H20和最后一步的乙酵一定要新鮮。要時刻記住降解的RNA數量與固定后樣品在水相中的時間成正比（為了得到高質量的RNA，最好不要超過5mm)。在所有的步驟中都使用DEPC處理的水。最后一步的乙醇和二甲苯可能吸潮，如果濕度較高，推薦將片子在100%乙酵中過3次，第二次放于二甲苯中時洗2min。如果濕度低，省略第三次的純乙醇，并縮短二甲苯的時間到30s。在每進行下一步之前都要擦掉片子邊緣和背部的水。有時片子排拒溶液，必要時重復。用鑷子夾住片子。

1.準備染色液（圖11-3)。

2.浸于70%的乙醇中30s。

3.純水洗（不要用PBS代替水，如果選用了PBS就會導致組織與LCM膜間黏著欠佳），在染缸中上下移動切片，5~30s。

4.梅耶蘇木精（Mayer’shematoxylin)30s

5.純水洗（不要用PBS代替水，如果選用了PBS就會導致組織與LCM胰間黏著欠佳），在染缸中上下移動切片，5~30s。

6.70%的乙醇洗30s。

7.100%的乙蘚洗30s。

8.曙紅Y中30s。

9.100%乙醇洗30s,重復2~3次。

10.二甲苯洗0.5~2min，2次。此時用于LCM樣品準備完畢。