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    發布時間:2020-07-14 09:51 原文鏈接: 用順序浮選法快速分離血清脂蛋白

    用超速離心機分離血清脂蛋白,常用順序浮選法(Sequence floating)和單次垂直管分離法(SVS),各種轉速和容量都可以做,下面介紹一種簡單、快捷的微量固定角式轉頭分離法,結果可供研究與臨床分析。

     

    一)設備:

    ● 日立CS150GXL 制備型微量超速離心機

    ● 轉頭:S140AT 固定角式轉頭,Nmax=140,000rpm,RCFmax=1,050,000(xg),最大容量10×2ml

    ● 離心管:1ml 聚碳酸脂(PC)全透明厚壁管

     

    二)溶液配置:

    A液:(密度=1.006克/毫升)。11.4克NaCl,0.1克EDTA-2Na置于1,000ml量筒,加500ml重蒸水及1ml 1N NaoH,充分混合直至全部溶解,加重蒸水至1,000ml,再加3ml重蒸水(NaCl含量為0.195mol)

    B液:(密度=1.182克/毫升),取100ml A液,加入NaBr 24.98克(Nacl:0.195mol.,NaBr:2.44mol.

    C液:(密度=1.478克/毫升),取100ml A液,加NaBr 78.32克(NaCl=0.195mol. NaBr:7.65mol.

     

    三)其他:

    樣品:禁食后抽取的靜脈血,低速離心去血球(不禁食抽取的血液中含乳麋粒-Chylomicrom第一次離心后會浮在VLDL之上)。

    顯色劑:脂肪紅7B(FAT RED 7B),便于肉眼觀察。

     

    四)離心分離:

    I.VLDL(密度<1.006克/毫升)分離

    1 PC厚壁管,下部為血清600μl,上部為300μl A液

    離心:140,000rpm,16℃,50分鐘,加速“5”,減速“7”

    結果:VLDL 浮在液面,有顯見的一薄層

     

    II.LDL(1.006克/毫升<密度<1.063克/毫升)分離

    第(I)次離心后的PC管,抽去上部含VLDL的溶液300μl。抽去VLDL后,在剩余的液體(約600μl)上加入300μl溶液B,并充分混勻。

    離心:140,000rpm,16℃,80分鐘,加速“9”,減速“7”

    結果:液面上浮著一層LDL(含有IDL)下部為HDL與血清蛋白混合液。

     

    III.HDL(1.063克/毫升<密度<1.21克/毫升)分離

    第(II)次離心后的PC管抽去上部含LDL的溶液300μl,抽去LDL后在剩余的液體(約600μl)中加入300μl 溶液C,充份混勻。

    離心:140,000rpm,16℃,140分鐘,加速“9”,減速“7”

    結果:液面上浮面一層HDL,下部是血清白蛋白和球蛋白。


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