以無菌0.25 毫升注射器抽取腦炎病毒懸液0.1 毫升，去除注射器內的氣泡。
取出小白鼠，左手將小白鼠固定，固定時用大拇指和食指握住小白鼠的頭部，左手手掌輕輕按住小白鼠的體部，使其俯臥在桌面上右手以滅菌棉簽蘸以碘酒，消毒小白鼠的右側顳部皮毛。
右手拿注射器在小白鼠顳部（眼與耳根連線的中點略偏耳朵的方向）剌入，進入顱腔進針2～3 毫米，不要插得太深，注射量為0.02～0.03 毫升（不可超過0.05 ml）。
注射完畢，將用過的注射器放入煮針鍋內煮沸消毒。動物一般在3～4 天后開始發病，食欲減退，活動遲鈍，毛聳，振顫，慢慢發展為麻痹，癱瘓死亡。
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