病毒的雞胚培養可用于:(1)某些病毒分離、增殖;(2)病毒的毒力測定、中和試驗;(3)生產疫苗等。
| 實驗方法原理 | 羊膜腔接種主要應用于從臨床材料(如患者咳嗽液等)分離流感病毒等。這種接種途徑可直接感染羊膜腔的內胚層,也可被雞胚咽下或吸入,引起全胚胎感染。另外,病毒也可被排泄到尿囊腔中,使尿囊腔中含有大量病毒。因此,在用羊膜腔接種分離病毒時,除可收獲羊水以外,還可收獲尿囊液。 |
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| 實驗材料 | 雞胚 |
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| 試劑、試劑盒 | 消毒劑 (2. 5% 碘酒和 75% 酒精) |
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| 儀器、耗材 | 檢卵燈照明燈卵杯卵盤雞胚開孔器等 |
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| 實驗步驟 |
1. 接種步驟與方法
(1) 將 10~12 日齡的雞胚在檢卵燈上照視,劃出氣室范圍,并在胚胎最靠近卵殼的一側做記號。
(2) 用 2.5%碘酒及 75% 的酒精分別消毒氣室部位的蛋殼,并用開孔器在氣室頂端鉆出一約10 mmX6 mm 的長方形裂痕,注意勿鉆破殼膜。
(3) 用 2. 5%碘酒再次消毒鉆孔區后,用滅菌的眼科小鑷子除去長方形卵殼和外層殼膜,并滴加滅菌液體石蠟一滴于下層殼膜上,使其透明,以便觀察胚胎的位置。
(4) 將注射器刺向胚胎的腭下胸前,以針頭撥動下顎及腿,當進入羊膜腔內時,可看到雞胚隨針頭的撥動而動,此時可注入0. 1-0. 2 ml 病毒液。
(5) 拔出針頭,孔區用 2. 5%碘酒消毒,然后用沾有碘酒通過火焰的小塊膠布將卵殼的小窗口封住,并于 33---35℃孵卵器內孵育 48-72 h比此過程要保持雞胚的鈍端朝上。
2. 解剖與收獲
(1) 收獲前雞胚須置 4℃冰箱 6h 或過夜,但不能放置時間過長(過長會引起散黃)。如急于收獲亦可置- 20℃ 冰箱1 h 左右。預冷的目的是,將雞胚凍死,使血液凝固,避免收獲時流出紅細胞,并同尿囊液的病毒發生凝集,造成病毒滴度下降。
(Z) 用 2. 5%碘酒和 75%酒精分別消毒氣室處的卵殼,并用滅菌剪刀剪去氣室部的卵殼,此時勿使其碎片落于未損傷的殼膜上。用無菌毛細吸管吸取尿囊液,然后左手持小鑷子夾起羊膜成傘狀,右手用毛細吸管插入羊膜腔吸取羊水,平均每胚可收獲 0. 5~1. 0 ml 羊水。
(3) 病毒通過胚胎機體后被排泄人尿囊腔,因此當羊水過少時,可用同胚少量尿囊液沖洗羊膜腔并吸取該洗液。 
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| 注意事項 | 1. 防止污染。為了減少污染的危險,整個過程均需無菌操作,否則雞胚一經污染,即迅速死亡或影響病毒的培養。
2. 適宜的培養溫度。接種過的雞胚,應根據實驗病原繁殖需要的溫度,放入 33-37°C 溫箱內培養。 |
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| 其他 | 1. 防止污染。為了減少污染的危險,整個過程均需無菌操作,否則雞胚一經污染,即迅速死亡或影響病毒的培養。
2. 適宜的培養溫度。接種過的雞胚,應根據實驗病原繁殖需要的溫度,放入 33-37°C 溫箱內培養。 |
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