真核細胞利用DEAE葡聚糖的轉染實驗

DNA

TBS DMEM 葡聚糖 DMSO PBS

培養箱 離心管

1.  接種約5×10⁵小鼠L型成纖維細胞/10 cm培養皿，培養3天至30%~50%匯片。

2.  對每個待轉染培養皿，用乙醇沉淀4 μg 待轉染的質粒DNA，在組織培養櫥中晾干沉淀，重懸于40 μl TBS中。

3.  吸去培養液，用10 ml 1×PBS洗滌培養皿，再用4 ml 完全DMEM-10NS洗1次。

4.  將DNA緩慢地（同時不斷晃動試管）加入80 μl 預熱的10 mg/ml DEAE-葡聚糖/TBS中。用200 μl 的移液器逐滴加120 μl DNA/DEAE-葡聚糖至每個培養皿中，使其均勻地覆蓋整個培養皿表面，輕輕旋動使之均勻一致，直到獲得一致的紅顏色。在加濕的CO₂培養箱中培養4 h（對某些類型的細胞可短一些）。

5.  從培養血中吸去含DNA/DEAE-葡聚糖的培養液。加5 ml 10%DMSO/PBS沖擊細胞。室溫下放置1 min，吸去DMSO，用5 ml 1×PBS洗1次，吸去毎個培養皿中加10 ml 完全培養液。

6.  培養細胞，在適當的時同進行分析。