4. LCs中的睪酮合成受m6A mRNA修飾調控
根據前期研究數據顯示m6A修飾可以參與胚胎發育，那么是否也能夠影響LCs發育呢？作者利用比色法檢測整體甲基化水平（云序生物提供此服務），發現在LCs發育過程中m6A整體水平逐漸下降，同時ALKBH5（Eraser）和FTO(Eraser)表達逐漸增加和METTL14(Writer)表達下調。為了進一步研究m6A修飾在LCs發育調控中的重要作用，作者還檢測了無精子癥或少精子癥患者體內LCs中m6A的甲基化水平，實驗表明這些患者體內的甲基化水平升高了，并且m6A和HSD3B（睪酮合成能力檢測）呈負相關，提示m6A修飾可能介導LCs中睪酮的合成。
圖4. LCs中的睪酮合成受m6A mRNA修飾調控
5.m6A甲基化影響Camkk2 RNA的穩定性
既然m6A能夠影響AMPK信號通路的激活，那么m6A修飾是否作用于Cammkk2呢？作者通過MeRIP-qPCR(云序生物提供此服務)技術證實Cammkk2存在2個甲基化修飾位點，同時經過HsCG處理后甲基化水平明顯下降，并且利用RIP（云序生物提供此服務）實驗分析發現Cammkk2與YTHDF2(Reader)緊密結合，這也證實了m6A修飾降低Camkk2的轉錄表達。
圖5. m6A甲基化影響Camkk2 RNA的穩定性
6. m6A甲基化促進Ppm1a的翻譯
作者觀察到YTHDF1（Reader）或METTL14敲除后LCs中PPM1A的表達降低，但是Ppm1a
mRNA的水平沒有明顯變化，有可能是蛋白穩定性或者翻譯效率導致Ppm1a蛋白表達下降。利用蛋白翻譯抑制劑CHX處理LCs，觀察METTL14敲除與未敲除后PPM1A在LCs中的降解速率，實驗結果表明HsCG降低了Ppm1a的表達，而敲除ALKBH5卻沒有；并且RIP（云序生物提供此服務）實驗分析發現PPM1A與YTHDF1緊密結合，同時CoIP(云序生物提供此服務)分析表明HsCG處理后促進了YTHDF1與EIF3A（真核翻譯起始因子3）和EEF2(真核翻譯起始因子2)結合,這些結果都說明m6A只是通過調節PPM1A的翻譯而不是影響蛋白的穩定性。作者利用MeRIP-qPCR(云序生物提供此服務)進一步探討Ppm1a甲基化位點信息，發現Ppm1a存在5個甲基化修飾位點，并且位于3’U 區域甲基化位點能夠促進Ppm1a的翻譯。
圖6. m6A甲基化促進Ppm1a的翻譯
7. HsCG對METTL14/ALKBH5的影響
研究發現HsCG通過誘導METTL14降解降低其表達，并且通過提高ALKBH5轉錄水平增加ALKBH5的表達，而CHIP實驗（云序生物提供此服務）也證實HsCG誘導促進TFEB和CEBPB與ALKBH5啟動子的結合從而提高其轉錄水平，增加ALKBH5的表達。
圖7. HsCG對METTL14/ALKBH5的影響