蛋白質可以在包被或非包被的毛細管柱分離，分離方案的選擇取決于靶蛋白的特異屬性。最重要的屬性就是pl，這由一般的凝膠電泳或CE決定。等電點聚焦分離是CE分離的一種。
| 實驗方法原理 | 等電點聚集（IEF） 分離可以通過 CE 輕易地達到，這也是選擇隨后用于蛋白質分離的緩沖液系統的有效的第一步。蛋白質和多肽是兩性的，因此它們的電荷由周圍的載體緩沖液決定。當蛋白質或多肽處于電場中，它移動到一個區域，這里周圍的 pH 等于其等電點（pI）。在包被的毛細管柱內可以通過在柱內充滿含兩性電解質的樣品溶液而達到 PH 梯度。高 pH 溶液（氫氧化鈉）放置在陰極池內，低 pH 溶液（磷酸）放置在陽極池內。電場通貫整個柱，兩性電解質和樣品移至柱上相應于它們各自的 pI 的位置上。如果分子漂移出等電點區域，就會被周圍的 pH 溶液誘導出電荷，然后分子就會移回至 0 電荷位置。以 0.01 pH 單位的次序用 pI 解離形成窄區域。為決定柱內某一特定蛋白質的 pI，在樣品混合物中加入已知 pI 的標記物，在標記物之間推斷出感興趣蛋白質的 pI。在 EOF 的缺失下，分離樣品后，需要蛋白質遷移通過探測器。用陰極池內的緩沖液替代陽極池的就可以產生 EOF，可以使得樣品區遷移通過探測器。這里討論的分離是假設聚焦過程中柱內沒有 EOF。但也可以在 EOF 存在的情況下進行分離。 |
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| 實驗材料 | 含 0.5～1.0 mg 蛋白質／ml 的溶于水的樣品 |
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| 試劑、試劑盒 | 兩性電解混合物(pH 3~10)20 mmol／L 氫氧化鈉(存儲于 4℃)10 mmol／L 磷酸(存儲于 4℃) |
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| 儀器、耗材 | 50 μm內徑包被的硅毛細管柱CE 儀器 |
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| 實驗步驟 |
1. 將兩性電解質混合物加入 0.5 ml 蛋白質樣品中以達到兩性電解質終濃度 2.5％（V/V）。如果需要，加入 IEF 標記達到終濃度 0.1 mg/ml 以校準柱子。
2. 加入樣品池。以增壓池子（0.5 lb/in2） 的方式注滿毛細管。
3. 在陽極池（負極）內放置 10 mmol/L 磷酸，在陰極池（正極）放置 20 mmol/L NaOH。
4. 在 8～10 kV 恒定電壓下聚焦樣品 4～6 min。檢測電流直至其達到穩定狀態。
5. 通過放置 20 mmol/L NaOH 在陽極的方式遷移樣品，調電壓至 10 kV。檢測蛋白質通過探測器遷移 15～20 min。
6. 每次運行后以 0.5 lb/in2 用 10 mmol/L 磷酸洗滌柱子達 1 min。室溫下將柱子存儲于運行緩沖液（短期）或水（長期）中。 展開 |
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