紫外分光光度計使用時應注意的問題

4.2測試準備 
4.2.1打開電源開關前，檢查一下樣品室內除比色皿架外，不應有其它東西遺留。  4.2.2打開電源開關，預熱十五分鐘左右。 
4.2.3儀器自動進入初始化，約等待10分鐘。初始化后，顯示器指示220nm，繪圖儀打印出“UV-VIS  SPECTROPHOTOMETER  MODEL  756MC”。  4.3測試過程 
4.3.1先按“GoToλ”鍵，再輸入相應波長，按“ENTER”鍵，波長設置完畢，此時顯示器指示所輸入波長數。 
4.3.2先把各被測試樣依次倒入比色皿中，其中一只存放參比試樣。試樣高度一般為比色皿高度的2/3-3/4，然后依次（一般參比放在靠身第一只）平穩的放入樣品室內的比色架中，并隨手將樣品室蓋上。  4.3.3按“ABSO/100T%”鍵，吸光度調零。 
4.3.4拉動試樣選擇桿，依次測定各個試樣，并按“START/STOP”鍵打印出結果。  4.4測試結束 
4.4.1取出比色皿，擦凈樣品室，放入干燥劑，并關閉樣品室蓋。 4.4.2關閉儀器電源，蓋上儀器防塵罩。 4.5附注 
4.5.1比色皿使用完畢，請立即用蒸餾水或有機溶液沖洗干凈，并用柔軟清潔的紗布將水漬擦 1、使用范圍 
凡具有芳香環或共軛雙鍵結構的有機化合物，根據在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。  朗伯-比耳定律 A =ECL  2、注意事項 
①空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應預先過濾，并棄去初濾液。 
②測定時，除另有規定外，應以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池。 
③在規定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規定外，吸收峰波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內；否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長的準確度，并以吸收度最大的波長作為測定波長。 
④一般供試品溶液的吸收度讀數，以在0.3～0.7之間的誤差較小。 
⑤吸收池應選擇配對，否則要引入測定誤差。在規定波長下兩個吸收池的透光率相差小于0.5%的吸收池作配對，在必要的情況時，須在最終測量扣除吸收池間的誤差修正值。
6 若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。
高效液相色譜儀操作步驟：   
1)． 過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜。   2)． 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。  
3)． 打開HPLC工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統。  
4)． 進入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。  
5)． 有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10 ml/min。  
6)． 調節流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。  
7)． 設計走樣方法。點擊file，選取select users and methods，可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊new method。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進樣閥的loading-inject轉換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。  
8)． 進樣和進樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數據和做標記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。

9)． 關機時，先關計算機，再關液相色譜。   10)． 填寫登記本，由負責人簽字。    高效液相色譜儀使用注意事項： 
1、泵正常工作時，在流動相和流速不變的前提下柱壓應該是穩定的，當然在換流動相時壓力變化是正常的，正常情況下如果柱壓升高基本上都是由色譜柱使用時間長引起的（只有更換色譜柱），如果正常情況下壓力突然降低有可能是（1）接頭處有漏液的地方，采取的方法是有濾紙檢查，如有漏液的地方用扳手擰緊即可。如果沒有漏液則可能是（2）白色的管子里面有氣泡從而導致流動相進不到泵里面去，采取的方法是排氣泡排氣時：先STOP停泵—打開排氣閥—按PURGE（快沖）鍵—等氣泡排完后先STOP停泵—擰緊排氣閥，其先后步驟不要搞反了。  2、泵正常工作時最高壓力最好不要超過200KG，所以打開泵以后可以將泵的最大壓力調到200KG，這樣如果壓力超過上限則會自動報警停機，流速最好不用超過1ML/MIN，如果使用時壓力超過200KG，建議將流速調低點以降低壓力（在色譜柱正常的情況下），如果是因為色譜柱長時間使用造成壓力升高則建議更換色譜柱（因為色譜屬于耗材長時間使用就需要更換，更換的主要依據色譜柱出峰不正常或者柱壓力過高）。 
3、泵正常工作時平均每15天左右向注油孔加潤滑油2~3滴。
 4、流動相里面如果有鹽或酸類，做完實驗后要先用95%二次蒸餾水與5%甲醇洗色譜柱40分鐘左右，然后用純甲醇洗30分鐘左右才可以關機。第二天如果繼續做實驗流動相里面仍舊有鹽或酸類，最好先用95%二次蒸餾水與5%甲醇過度20分鐘，再用流動相。如果流動相里面只有甲醇，水，乙腈。做完實驗后就不用95%二次蒸餾水5%甲醇沖洗，可直接用純甲醇洗30分鐘即可關機。 5、C18色譜柱的耐酸PH值范圍3—8使用時不要超出。 
6、儀器長期不用時一定要將濾頭泡在甲醇里半月開機一次，如果開機時泵抽不上液可以打開排氣閥按PURGE快沖。 
7、調反壓器時要注意等液體流出來以后才能調一般調8—10KG，比如現在泵顯示屏顯示柱壓50KG那再增加10KG顯示屏上顯示柱壓60KG然后擰緊鎖緊螺母。 
8、色譜儀關機順序：清洗液路時可以把檢測器直接關機，清洗結束后先按STOP讓泵停止后在關電源不允許直接關機。