組織切片的免疫過氧化物酶標記實驗

組織樣品

PBS過氧化氫PAP二氨基聯苯胺

離心機加濕盒培養箱

1.  將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒，由冰凍切片儀中取出載有切片的載玻片，放入玻片盒中（每邊放6片），或故濕盒中（載玻片勿相互接觸）。

2.  待載玻片達室濕且未干時，鋪加PBS于切片上（勿溢出玻片）。

3.  室溫下在含0.25%過氧化氫的PBS中溫育30 min，以PBS洗3次。

4.  稀釋的第一杭體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min（每一載玻片上加40~50 μl 抗體，應能蓋住切片）。

5.  用與泵相連的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并從另一端加上抗體，蓋上加濕盒，室溫溫育1 h。

6.  以PBS冼玻片3次（5 min/次），從切片一端加入新的PBS緩沖液，由另一端吸去舊的緩沖液。

7.  載玻片上加特異性橋連二抗，室溫溫育1 h。以PBS洗3遍。

8.  加PAP復合物，室溫放1 h。以PBS洗3遍。

9.  室溫下DAB底物液顯色2~5 min。（顯色時間長短依實驗經驗而定）。

10.  冼片并固片，置玻片盒中在暗處存放（不必凍存）。