細胞凋亡：流式細胞儀檢測實驗

要分析的細胞 在FACS緩沖液中

FACS緩沖液 冰冷的100%乙醇（如果細胞是抗體標記的則用70%乙醇） 1 mg ml RNase A 含50μg ml 二碘化丙錠（PI)的PBS

流式細胞儀

1)凋亡刺激后，從培養液中沉淀所要分析的細胞，同樣沉淀一未處理的對照培養液。重懸于3 ml的冰冷的FACS緩沖液，然后300 g離心5 min沉淀細胞。輕輕晃動試管以重懸沉淀。

如果同時對細胞其他表面表達的Marker染色，這步應該在固定之前做。

2a)如果細胞沒有被其他熒光團標記的抗體染色：重懸細胞于FACS緩沖液，邊渦旋振 蕩邊加入1倍體積的冰冷的100%乙醇，通過這樣的方式固定細胞。室溫孵育細胞 30 min。

2b)如果細胞被其他突光團標記的抗體染色：重懸細胞于500?1000μL FACS緩沖液，邊 輕柔渦旋振蕩邊加入3倍體積的冰冷的70%乙醇。于4℃孵育細胞，不少于1 h。使用乙醇作為固定劑，這點很關鍵。其他的固定劑比如戊二醛或甲醛由于染色質的交聯不能盡 可能地保持亞二倍體峰值。

3)沉淀細胞。重懸于冰冷的FACS緩沖液，然后300 g離心5 min沉淀細胞。重懸細胞于250?500μL含40μg/ml RNase A和50μg/ml 二碘化丙錠的FACS緩沖液。 室溫暗室孵育不少于30 min。

4)用流式細胞儀（FL2或FL3)以線性模式（Holmes and Fowlkes, 1991)分析細胞。 可以通過選通低于大的G0/G1DNA峰值的區域的染色細胞來計算細胞凋亡的部分。