細胞核的預先分離

細胞

PBSRSB 緩沖液

醫用臺式離心機Dounce 勻漿器

1. 在 4℃ 用 PBS 清洗細胞，用一醫用臺式離心機低速離心。然后用含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 緩沖液懸浮沉淀。每 10⁷ 個細胞用 1 ml 緩沖液。用 0.002 英寸間隙的 Dounce 勻漿器破碎細胞。

含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 緩沖液：

10 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.4)

10 mmol/L NaCl

1.5 mmol/L MgCl₂

每毫升溶液中含的 Tween-DOC 貯存液和 850 μl RSB。用前從 100X 的貯存液中加入 VRC 和 AEBF，至終濃度為 2 mmol/L 和 1 mmol/L。

Tween 40 和 DOC 貯存液：

6.67% (w/v) Tween 40

3.33% (w/v) 脫氧膽酸鈉

可分成小份凍存于 -20℃

2. 4℃，1000 g 離心 3 分鐘沉淀細胞核。用含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 緩沖液洗后再次沉淀細胞核。