經典電泳色譜儀分離模式有自由界面電泳、紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、SDS-PAGE電泳、瓊脂糖凝膠電泳、等電聚焦電泳和等速電泳等。經典電泳儀由于受到焦耳熱的限制,只能在低電場強度下進行電泳,分離時間長,分離效率低。
一、自由界面電泳:
1、原理:溶液在U型管中,根據樣品各組分泳動速度的不同進行分離。
2、特點:沒有載體,對流比較嚴重,組分不能完全分離,成分相互重疊,檢測困難。
3、應用:目前很少用。
二、紙電泳:
1、載體:濾紙。
2、原理:由于載體孔徑大,沒有分子篩效應,主要根據樣品各組分質荷比的不同進行分離。
3、特點:濾紙結構疏松,微孔較大,致使電泳速度慢,時間長,樣品擴散嚴重,分辨率低。
4、應用:多用于核苷酸的分離。
三、醋酸纖維素薄膜電泳:
1、載體:醋酸纖維素薄膜。
2、原理:由于載體孔徑大,沒有分子篩效應,主要根據樣品各組分質荷比的不同進行分離。
3、與紙電泳相比的優點:電滲影響小,化學惰性好,能將對流降到zui小。
4、應用:適用于蛋白質和同工酶等的分離分析,特別適合病理情況下微量異常蛋白質的檢測。
四、聚丙烯酰胺凝膠電泳:
1、載體:聚丙烯酰胺凝膠。
2、原理:質荷比和分子篩效應。
3、特點:機械強度好,透明有彈性,化學性能穩定,無吸附作用,幾乎無電滲作用,可制成不同孔徑的凝膠,分辨率高。
4、應用:用于蛋白質和較小分子核酸的分離。
五、SDS-PAGE電泳:
1、載體:聚丙烯酰胺凝膠。
2、原理:分子篩效應。
3、特點:樣品無需純化,操作簡便快速,重復性高。
4、應用:目前測定蛋白質亞基相對分子量的zui好方法。
六、瓊脂糖凝膠電泳:
1、載體:瓊脂糖凝膠。
2、原理:分子篩效應。
3、特點:凝膠孔徑大,對樣品吸附極微,分辨率高,重復性好。
4、應用:用于核酸的分離。
七、等電聚焦電泳:
1、載體:聚丙烯酰胺凝膠等。
2、原理:利用蛋白質分子或其它兩性分子等電點的不同,在一個穩定、連續、線性的pH梯度中進行分離。
3、特點:分辨率高,區帶清晰且窄,分辨率至少可達0.01 pH單位。
4、應用:分離對象只限于蛋白質和其它兩性分子,常用于同工酶的分離分析和pI測定。
八、等速電泳:
1、載體:聚丙烯酰胺凝膠等。
2、原理:用淌度比樣品中任何組分的淌度都大的電解質作為先導電解質,用淌度比樣品中任何組分的淌度都小的電解質作為尾隨電解質,樣品組分夾在先導電解質和尾隨電解質之間,根據各自淌度的不同進行分離。
3、特點:區帶界面明顯,具有富集和濃縮作用。
4、應用:目前應用不多。