芝麻黃曲霉素總量檢測

【進口芝麻檢出黃曲霉毒素超標】新年初，黃島檢驗檢疫局發布近期進出口檢驗檢疫情況，進口芝麻中檢出了黃曲霉毒素超標等情況受到關注。芝麻是我國主要油料作物之一，且芝麻營養豐富，成為多種食品的主要材料。中國即成為芝麻生產與消費大國。目前我國年食用和加工芝麻約需要110萬噸，但芝麻年生產量只有65萬-70萬噸，產不足需導致2013年前9個月我國芝麻進口量大增。海關、出入境檢驗檢疫等部門對芝麻檢測量逐漸增大。

然而，芝麻也是容易感染黃曲霉的農作物之一，黃曲霉毒素對芝麻產品具有較高的親和性。黃曲霉毒素具有極強的致癌性和毒性，黃曲霉菌的侵染和產生不僅發生在芝麻產品的種植、成熟、收獲期中，而且在收獲的晾曬、存儲及其以后的加工、儲運等加工過程中也會產生。我國芝麻種植面積大，地域廣泛，且目前我國農村芝麻種植地區尚未實施備案管理或認證資質，國家相關部門無法進行完全控制。此外，我國從國外進口的芝麻也有質量問題，近期，檢驗檢疫局連續檢出進口芝麻不合格，黃曲霉毒素超標情況受到關注。

Pribolab(普瑞邦)作為專業從事霉菌毒素檢測技術與產品服務的主要供應商之一，整合了原北京泰樂祺檢測應用實驗室，專注于霉菌毒素檢測產品和技術解決方案的服務,以期快速提出解決方案。針對芝麻中黃曲霉素總量的檢測，以穩定、準確、快速、簡單為導向，建立了一套完整的解決方案。

參考標準：根據國標《GB/T18979-2003》食品中黃曲霉毒素的測定標準。

（一）免疫親和柱-高效液相色譜法：GB/T18979-2003國標方法

1. 所需設備和耗材　　

高效液相色譜儀

色譜柱：真菌毒素專用色譜柱（PRC-18，Pribolab）。

免疫親和柱：PriboFast?黃曲霉毒素總量免疫親和柱(3ml，25支/盒，IAC-011-3，Pribolab，快速過柱型)。

高速均質器：達到22000rpm 以上(EQ-WR-1L，Pribolab)。

玻璃纖維濾紙：PriboFast?玻璃纖維濾紙（GMF-110，Pribolab）

PriboFast?八位泵流操作架（Pribolab，用于控制免疫親和柱過柱流速）

標準品：黃曲霉毒素混標（2μg/ml 黃曲霉毒素 B1, G1 和0.5μg/ml黃曲霉毒素B2, G2 (4/1/4/1)，STD#1081，Pribolab）

2. 樣品前處理:普瑞邦針對糧谷、油脂、油料等提供不同的處理方案(詳細方案請聯系普瑞邦，普瑞邦開發了針對不同產品提供優化的處理方案)

3. 免疫親和柱凈化: 

富集:提取液以2-3mL/min流速通過免疫親和柱，直至2-3mL空氣通過柱體；

洗滌: 10mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，以10mL水洗柱子2次，并使2-3mL空氣通過柱體。

洗脫：加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,孵育30秒以上,以流速為1-2mL/min過柱，收集全部洗脫液供檢測用。

4. 高效液相色譜分析                         

（二）酶聯免疫法

1. 方法原理

采用直接競爭酶聯免疫法，在微孔板上預包被黃曲霉毒素抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素標準品溶液）及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素特異抗體。樣本或標準品溶液中的抗原與預包被在板孔上的抗原競爭結合酶標抗體。未結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣品吸光值與其所含黃曲霉毒素總量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣品中黃曲霉毒素總量的含量。

2. 試劑和材料：酶聯免疫試劑盒（PriboFastR黃曲霉毒素總量試劑盒EKT-011，Pribolab）

3. 樣本前處理：芝麻及其制品：粉碎、溶解、離心取上清液待測。

4. 檢測步驟

4.1 免疫反應30min；洗板5次；顯色反應30min；終止反應，酶標儀讀OD值。

5. 分析結果的表述

用酶標儀判讀結果。

（三）免疫金標快速檢測法

1. 方法原理

黃曲霉毒素總量快速檢測條應用了競爭抑制免疫層析的原理，樣本中的黃曲霉毒素總量在酶標孔中與膠體金標記的特異性抗黃曲霉毒素單克隆抗體結合，抑制了抗體和NC膜檢測線上AF－BSA偶聯物的結合。如果樣本中黃曲霉素總含量大于0.5 ug/L，檢測線不顯顏色，結果為陽性；反之，檢測線顯紅色，結果為陰性。

2. 試劑和材料

膠體金檢測試紙：PriboStripTM黃曲霉毒素總量免疫金標快速檢測條（PR-011，Pribolab）

3. 分析步驟：芝麻及其制品溶解后取上清液檢測。吸取樣品滴加到加樣孔中，8-15分鐘讀取結果。在C線顯色的情況下：T 線顯色比C線深或一樣深是陰性。T 線顯色比C線淺，或無顯色是陽性結果。