1 花粉的體外萌發試驗
在花粉萌發和花粉管伸長的體外試驗中,常用的培養某是蔗糖溶液或含蔗糖的瓊脂培養基。各種植物的花粉萌發要求的蔗糖質雖濃度不同,一般為 2%-20%, 某些水生植物的花粉在蒸餾水中有更高的萌發率。培養基中加人 0.01%的硼酸,對多數植物花粉萌發都有促進什用。有些植物的花粉要在加有蔗糖的明膠培養基上才有較好的萌發效果。
用液體培養基時,由于花粉沉降而導致萌發不計,可以采用懸滴培養法,也可以采用玻璃紙作為支傳物來進行花粉萌發。使用瓊脂培養基時,培養某倒在凹玻片上或者小培養皿中,使于在顯微鏡下觀察。
在研究花粉萌發時,首先應采用不同濃度的蔗糖、硼酸的組合配制培養基,從中篩選適當的配方。花粉粒放入培養基后,應選擇在最適溫度下培養'一般情況下,花粉在培養基上培養數十分鐘至數小時即可觀察到其萌發出花粉管,實驗過程應確定在培養了一致的時間后開始統計萌發率。-般將花粉管長度超過花粉直徑 2倍以上判定為己萌發,計算已萌發花粉在視野中全部花粉中的百分比,每組實驗材料統計 20個或更多視野為宜。
2 花粉管生長途徑的熒光顯微觀察
在花粉粒及花粉管的研究中,經常使用熒光顯微術。用熒光染料苯胺藍可以使花粉管壁及花粉管的胼胝質塞染色,而在紫外線或籃紫光下呈鮮黃色或黃綠色。觀察被子植物雌蕊中花粉管牛長通常的步驟是:授粉后的雌蕊以 FAA 固定液固定, 5%的氫氧化鉀或氫氧化鈉離析和透明至適度( 一般需1h 或更長時間),蒸餾水漂洗 3 次,取適量材料于載玻片上,滴加 1-2 滴苯胺藍染液(水溶性苯胺藍 0.lg, 溶于1/30mol/L 磷酸鉀溶液 100mL,避光、冷藏保存至近無色。)染色約1h, 加 50%甘油 1 滴,蓋上蓋玻片,必荌時施以輕壓。把這樣處理后制作的壓片用熒光顯微鏡進行觀察,在籃紫光下雌蕊組織中的花粉管呈現很強的熒光,很便于觀察。
另外,在不使用熒光顯微鏡時,也有只使花粉管染色的方法:授粉后的雌蕊在酒精-三氯甲燒-醋酸 (3:4:1)溶液中固定 30min, 在 70%酒精、 50%酒精、 30%酒精、蒸餾水中逐一浸泡 2min 后取出,用苯胺藍-藏紅 O 染液(水溶性苯胺藍 0.75g, 藏紅 00.25g, 溶于加熱的 45%醋酸,過濾)染色,然后,在 45%醋酸溶液中透明 1 h, 以乳酸酚封片。于顯微鏡下觀察,花柱組織染成極淺的紫色,而花粉管染成深藍色,容易區分。 展開 |