FRET原理
熒光共振能量轉移(FRET)是一種物理現象,在生物醫學研究和藥物發現中已經越來越流行。FRET是能量從供體分子(donor)到受體分子(acceptor)的無熱量傳輸。供體分子是最初吸收能量的熒光基團,而受體是隨后轉移能量的熒光基團,這種共振相互作用發生在大于原子間的距離上,而沒有轉化為熱能并且沒有任何分子碰撞。能量轉移導致供體的熒光強度和激發態壽命的減少,以及受體的發射強度的增加。以發生FRET的方式相互作用的一對分子通常稱為供體/受體對。由于它對距離敏感,FRET被用于觀察分子間相互作用。

圖2.
從供體到受體分子的FRET過程圖。水平線代表每個分子的離散電子能級。能級被標記為單峰態(S)或三重態(T),其下標分別為0,1或2(分別代表基態,第一激發態或第二激發態)。分子的電子通常處于基態S0。電子可以通過許多過程被激發到更高的能級,包括光吸收和化學反應。
盡管有很多影響FRET的因素,但要使FRET發生需要滿足的主要條件相對較少:
供體和受體分子必須彼此接近(通常為10-100?)
受體的激發光譜必須與供體的發射光譜重疊。它們重疊的程度稱為光譜重疊積分(J)
供體和受體過渡偶極的方向必須近似平行
假設供體受體對是相匹配的,發生FRET所必需的最關鍵元素是供體受體對之間的緊密接近。F?rster證明了過程(E)的效率取決于供體與受體之間距離的六次方的倒數,如以下等式所示:
E = R o 6 /(R o 6 + r 6)
其中Ro是能量傳遞一半時的F?rster距離,r是供體與受體之間的實際距離。Ro的大小取決于體與受體的光譜性質。F?rster距離在20到90?之間時,對研究生物大分子最有用。
Tide Quencher?系列
盡管DABCYL已被用于開發各種FRET應用,但對于較長波長的染料(例如熒光素,羅丹明和花青素)的淬滅效率較低,限制了其在敏感的熒光FRET探針開發中的應用。另外,DABCYL的吸收光譜對環境敏感。我們已開發出耐用的Tide Quencher?受體染料,用于研發更長波長的FRET探針,Tide Quencher?染料是消除經典淬滅劑限制的絕佳選擇。

Tide Quencher?染料的主要優點:
探索其他淬滅劑可能無法實現的FRET潛力
多種反應形式便于自我構建所需的FRET生物分子
與您所需的熒光供體完全匹配
性價比高
Tide Quencher?系列產品:
| 淬滅劑 | 激發(nm) | 消光系數(ε) | CF260 | CF280 |
| Tide Quencher?1 | 488 | 20,000 | 0.147 | 0.194 |
| Tide Quencher?2 | 512 | 21,000 | 0.100 | 0.120 |
| Tide Quencher?2WS | 515 | 21,000 | 0.100 | 0.120 |
| Tide Quencher?3 | 576 | 22,000 | 0.085 | 0.091 |
| Tide Quencher?3WS | 576 | 90,000 | 0.186 | 0.205 |
| Tide Quencher?4 | 604 | 23,000 | 0.146 | 0.183 |
| Tide Quencher?4WS | 604 | 90,000 | 0.149 | 0.136 |
| Tide Quencher?5 | 661 | 24,000 | 0.170 | 0.082 |
| Tide Quencher?5WS | 661 | 130,000 | 0.072 | 0.082 |
| Tide Quencher?6WS | 691 | 130,000 | 0.120 | 0.102 |
CF260是染料在260 nm處的校正因子,用于消除染料對260 nm處的吸光度的影響(用于寡核苷酸和核酸標記)
CF280是染料280 nm處的校正因子,用于消除染料對280 nm處的吸光度的影響(用于肽和蛋白質標記)