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    發布時間:2021-03-01 17:49 原文鏈接: 熒光共振能量轉移FRET肽和寡核苷酸熒光標記的應用2

           FRET原理

     

           熒光共振能量轉移(FRET)是一種物理現象,在生物醫學研究和藥物發現中已經越來越流行。FRET是能量從供體分子(donor)到受體分子(acceptor)的無熱量傳輸。供體分子是最初吸收能量的熒光基團,而受體是隨后轉移能量的熒光基團,這種共振相互作用發生在大于原子間的距離上,而沒有轉化為熱能并且沒有任何分子碰撞。能量轉移導致供體的熒光強度和激發態壽命的減少,以及受體的發射強度的增加。以發生FRET的方式相互作用的一對分子通常稱為供體/受體對。由于它對距離敏感,FRET被用于觀察分子間相互作用。

     


           圖2. 從供體到受體分子的FRET過程圖。水平線代表每個分子的離散電子能級。能級被標記為單峰態(S)或三重態(T),其下標分別為0,1或2(分別代表基態,第一激發態或第二激發態)。分子的電子通常處于基態S0。電子可以通過許多過程被激發到更高的能級,包括光吸收和化學反應。

     

           盡管有很多影響FRET的因素,但要使FRET發生需要滿足的主要條件相對較少:

     

           供體和受體分子必須彼此接近(通常為10-100?)

           受體的激發光譜必須與供體的發射光譜重疊。它們重疊的程度稱為光譜重疊積分(J)

           供體和受體過渡偶極的方向必須近似平行

     

           假設供體受體對是相匹配的,發生FRET所必需的最關鍵元素是供體受體對之間的緊密接近。F?rster證明了過程(E)的效率取決于供體與受體之間距離的六次方的倒數,如以下等式所示:

     

    E = R o 6 /(R o 6 + r 6)

     

           其中Ro是能量傳遞一半時的F?rster距離,r是供體與受體之間的實際距離。Ro的大小取決于體與受體的光譜性質。F?rster距離在20到90?之間時,對研究生物大分子最有用。

     

           Tide Quencher?系列

     

           盡管DABCYL已被用于開發各種FRET應用,但對于較長波長的染料(例如熒光素,羅丹明和花青素)的淬滅效率較低,限制了其在敏感的熒光FRET探針開發中的應用。另外,DABCYL的吸收光譜對環境敏感。我們已開發出耐用的Tide Quencher?受體染料,用于研發更長波長的FRET探針,Tide Quencher?染料是消除經典淬滅劑限制的絕佳選擇。

     

     

           Tide Quencher?染料的主要優點:

     

           探索其他淬滅劑可能無法實現的FRET潛力

           多種反應形式便于自我構建所需的FRET生物分子

           與您所需的熒光供體完全匹配

           性價比高

     

           Tide Quencher?系列產品:

     

    淬滅劑 激發(nm) 消光系數(ε) CF260 CF280
    Tide Quencher?1 488 20,000 0.147 0.194
    Tide Quencher?2 512 21,000 0.100 0.120
    Tide Quencher?2WS 515 21,000 0.100 0.120
    Tide Quencher?3 576 22,000 0.085 0.091
    Tide Quencher?3WS 576 90,000 0.186 0.205
    Tide Quencher?4 604 23,000 0.146 0.183
    Tide Quencher?4WS 604 90,000 0.149 0.136
    Tide Quencher?5 661 24,000 0.170 0.082
    Tide Quencher?5WS 661 130,000 0.072 0.082
    Tide Quencher?6WS 691 130,000 0.120 0.102

     

           CF260是染料在260 nm處的校正因子,用于消除染料對260 nm處的吸光度的影響(用于寡核苷酸和核酸標記)

     

           CF280是染料280 nm處的校正因子,用于消除染料對280 nm處的吸光度的影響(用于肽和蛋白質標記)


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