砷鹽多由藥物生產中使用的無機試劑及搪瓷反應器引入,砷為毒性雜質,須嚴格控制其量。
1.古蔡氏檢砷法
(1)原理
金屬鋅與酸作用產生新生態氫,將藥物中微量砷還原為砷化氫,當砷化氫氣體遇溴化汞紙時,根據含砷量不同產生黃色至棕色的砷斑,與同一條件下定量標準砷溶液所生成的砷比較判定供試品砷鹽是否符合限量規定。
(2)操作方法
①標準砷斑的制備 精密量取標準砷溶液2ml,置A瓶中,加鹽酸5ml與水21ml,再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴,在室溫放置10min后,加鋅粒2g,立即將照上法裝妥的導氣管密塞于A瓶上,并將A瓶置25~40℃水浴中,反應45min,取出溴化汞試紙,即得。
若供試品需經有機破壞后再行檢砷,則應取標準砷溶A液代替供試品,照該藥品種項下規定的方法同法處理后,依法制備標準砷斑。
②檢查法 于導氣管中裝入醋酸鉛棉花60mg(裝管高度為60～80mm),再于旋塞的頂端平面上放一片溴化汞試紙(試紙大小以能覆蓋孔徑而不露出平面外為宜),蓋上旋塞蓋并旋緊。取按各藥品項下規定方法制成的供試液,置A瓶中,照標準砷斑的制備,自“再加碘化鉀試液5ml”起,依法操作。將生成的砷斑與標準砷斑比較,不得更深。
(3)測定條件
①標準砷溶液的制備稱 取三氧化二砷0.132g,置1000ml量瓶中,加20%氫氧化鈉溶液5ml溶解后,用適量的稀硫酸中和,再加稀硫酸10ml,用水稀釋至刻度,搖勻,作為貯備液。臨用前,精密量取貯備液10ml,置1000ml量瓶中,加稀硫酸10ml,用水稀釋至刻度,搖勻,即得(每1ml相當于1μg的As)。
②標準砷斑應用2ml標準砷溶液制成。藥物含砷限量不同,可按規定限量改變供試品取用量,不可改變標準砷溶液取量。
③因為As5+生成砷化氫的速度慢,在反應液中加入還原劑酸性氯化亞錫及碘化鉀,將供試品中可能存在的As5+還原為As3+;氧化生成的碘又被氯化亞錫還原為碘離子,與反應中產生的鋅離子形成穩定的絡離子,使生成砷化氫的反應不斷進行。
④供試品及鋅粒中可能含有少量硫化物,在酸性條件下將產生硫化氫氣體。該氣體遇溴化汞試紙生成硫化汞色斑,產生假陽性,干擾試驗結果。采用醋酸鉛棉花,可預先吸收硫化氫,避免其與溴化汞試紙作用。醋酸鉛棉花用量太少,可能除不盡硫化氫,太多或塞得太緊會阻礙砷化氫的通過。所以藥典規定取醋酸鉛棉花60mg,裝管高度為60～80mm,這樣即使在1000μg硫存在下也不干擾測定。
(4)注意事項
①若供試品為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等,在酸性溶液中生成硫化氫或二氧化硫氣體,與溴化汞作用生成黑色硫化汞或金屬汞,干擾比色。應先加硝酸處理,使氧化成無干擾的硫酸鹽,過量的硝酸及產生的含氮氧化物應蒸干除盡。
②供試品若為鐵鹽,不僅消耗還原劑,影響測定條件,且能氧化砷化氫。應該先加酸性氯化亞錫試液,將Fe3+還原為Fe2+,再依法檢查。
③供試品若為強氧化劑或在酸性溶液中能產生強氧化性物質者,如亞硝酸鈉在酸性溶液中能產生亞硝酸和硝酸,不僅消耗鋅粒且產生含氮的氧化物氧化新生態的氫,影響砷化氫的生成。因此,需加入硫酸先行分解后依法測定。
④具環狀結構的有機藥物,因砷可能以共價鍵與其結合,需進行有機破壞后再檢查,常用的有機破壞法有堿破壞法和酸破壞法。
若供式品需經有機破壞后再行檢砷,則制備標準砷斑時,應取標準砷溶液2.0ml代替供試品,照各品種項下規定的方法同法處理后,依法制備標準砷斑。
⑤砷斑遇光、熱及濕氣則褪色。如需保存可將砷斑在石蠟飽和的石油醚溶液中浸過晾干或避光置于干燥器內,也可將砷斑用濾紙包好夾在記錄本中保存。
2.二乙基二硫代氨基甲酸銀法(Ag-DDC)
該法不僅可用于限量檢查,也可用作微量砷鹽的含量測定。
(1)原理
金屬鋅與酸作用產生新生態氫,與微量砷鹽反應,生成具揮發性的砷化氫,砷化氫與二乙基二硫代氨基甲酸銀(Ag-DDC)作用,游離出銀,此膠態的銀呈紅色,與同條件下一定量標準砷溶液所產生的顏色比較,或在510nm波長處測定吸光度,以判斷砷鹽限量。
(2)操作方法
①標準砷對照液的制備 精密量取標準砷溶液5ml,加鹽酸5ml與水21ml,再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴,在室溫放置10min后,加鋅粒2g,立即將導氣管與A瓶密塞,使生成的砷化氫氣體導入另一D管中,并將A瓶置25～40℃水浴中反應45min,取出D管,添加氯仿至刻度,混勻,即得。
若供試品需經有機破壞后再行檢砷,則應取標準砷溶液代替供試品,照各藥品項下規定的方法同法處理后,依法制備標準砷對照液。
②檢查法 于導氣管中裝入醋酸鉛棉花60mg(裝管高度約80mm),并于D管中精密加入二乙基二硫代氨基甲酸銀試液5ml。取照各藥品項下規定方法制成的供試液置A瓶中,照標準砷對照液的制備,自“再加碘化鉀試液5ml”起,依法操作。將所得溶液與標準砷對照液同置白色背景上,從D管上方向下觀察、比較,所得溶液的顏色不得比標準砷對照液更深。必要時,可將所得溶液轉移至1cm吸收池中,用適宜的分光光度計或比色計在510nm波長處以二乙基二硫代氨基甲酸銀試液做空白,測定吸收度,與標準砷對照液按同法測得的吸收度比較,即得。