薄層色譜小知識

1、怎樣提高點樣效率？   

點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。

實驗證明：定量毛細管更適合較小體積的點樣；微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現象的影響較大。為避免不同定量毛細管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應注意更換樣品時，應將毛細管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點發生空心現象，常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距離1-2cm底邊距離1.5cm;HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm底邊距1cm.

2、展開劑的選擇

TLC與HPLC相比，一個突出的優點就是流動相的選擇具有更大的靈活性，流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1－0.7之間并達到較好的分離，與此對應的是流動相要有適當的強度和組成。流動相強度越大，溶質Rf值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物、根據相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下：根據分離樣品性質、薄層色譜板性質選擇一個二元溶劑體系，通過調節溶劑比例以尋求適合Rf值，適合的Rf值找到后，再尋求極性參數相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點組成一個三角形，則可看到：三角形頂點是二元體系，邊是三元體系，三角形內是四元體系，并且極性一致，可根據幾何原理得出任一點組成，這種方法較為直觀，也較簡單。  

3、TLC的通用顯色方法

理想的顯色希望靈敏度高，斑點顏色穩定、斑點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的深度與物質的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有：

1、紫外照射法：方便、不破壞樣品；

2、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結合靈敏度高于該兩法單獨使用；

3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質被鑒別，有熒光物質更明顯；

4、硫酸溶劑：對絕大多數有機物有效，但有破壞性。