(3) 用 10% 〇 //V ) 甲醇、7 % ( V /V ) 乙酸進行簡單的凝膠脫色。
利用基于微波爐的方案可以加快染色過程的進行。
SYPRO R uby 蛋白質凝膠染料具有相對較高的消光系數和量子產率，因此它十分亮眼,
化學穩定性和光穩定性都很高。光譜的激發可借助紫外線或是藍光光源;
蛋白質帶目測呈橘紅色。熒光蛋白質染色的機制在于該染料與蛋白質條帶和凝膠介質結合的差異性,
凝膠介質不與染料結合。因此蛋白染色劑本身是不具熒光性的。 SYPRO R uby
蛋白質凝膠染料亮度大、穩定性高、檢測靈敏度強且便于使用，加上其蛋白質組應用的文獻之多以及積極的市場營銷攻勢，該產品
為其后蛋白質凝膠染色劑的發展提供了比較標準，正如銀染法仍然是檢測靈敏度的比較基準一樣。
Epicocconone 蛋 白 質 凝 膠 染 色 劑 ： Deep Purple 和 Lighting Fast 蛋白質凝膠染色劑
Epicocconone 蛋 白 質 凝 膠 染 色 劑 是 種 從 真 菌 黑 附 球 菌 (EpicoccMOT Tiignwn) 中提取的熒光團，用于總蛋白質染色試劑盒中。該染料被冠以了多種商品名稱，包 括 DeepPurple 和 Lighting Fast 總蛋白質凝膠染料，方案各異。下面是一種方案。
(1) 將 SDS-PAGE凝 膠 在 7.5%(V/V) 的 乙 酸 中 固 定 1h。
(2) 用水清洗凝膠 (2X 30 m i n )。
(3) 熒光團儲備液在水溶液中稀釋后, 將凝膠在該水溶液中染色 I h。
⑷ 將 凝 膠 在 0. 05% (V /V ) 的氨水中孵育 (3X 10 m i n );
(5) 立即捕捉影像，可用紫外線、可見藍光或可見綠光激發。
該染色劑的靈敏度可與 S Y P R O R u b y 蛋白質凝膠染料相媲美，或 者 較 之 更 好（Belland K a r u s o ，2003; Mackintosh etal. ，20 〇 3)。染色是可逆的，并與質譜分析兼容。暗紅色的信號并非特別顯著，其靈敏度完全取決于染色劑的熒光特性, 因此背景較弱。該染色方法似乎需要痕量的在乙酸固定后仍然與蛋白質形成復合物的 S D S 。 這種染色劑在水中僅發出微弱的熒光 (綠色），但 是 在 經 S D S 處理的蛋白質存在的情況下，熒光增強并發生紅移 。 Epicocconone 蛋白質凝膠染料已被證實能與賴氨酸反應，形成可被堿水解的熒光加合 物 ，因此產生突光并使得染色具有可逆性 (Coghlan et al. ,2005)。濃縮的染色儲備液必須冷凍保存，在使用前解凍。考慮到穩定性因素，影像捕捉應該在染色結束后立即進行。
熒光素衍生物
含有烴類尾部的熒光素衍生物是很有效的蛋白質凝膠染色劑。將 5-十二酰基氨基-(C 12-F L )、5-十六酰基氨基-(C 16-F L ) 及 5-十八酰基氨基-奕光素-(C 18-F L ) 用于一些類同于經典考馬斯亮藍 R -250 染色法的樣品染色方案中，可證明該染色劑敏感度比得上銀染法。最 有 效 的 熒 光 團 為 C 16-F L 。例 如 ，凝 膠 染 色 時 染 液 為 3 0 % (V /V ) 乙醇、7. 5 %(v/v) 乙 酸 、1umol/L 染料, 染液更換兩次。再用水清洗，水也要更換兩次，最 后 用 7.5%乙酸脫色。染色劑具焚光性，易知其基本原理是同結合在復合蛋白質中的殘余 S D S 相結合; 可兼容質譜分析 ( K a n g et a L ，2003)。熒光素的光譜激發和發射分別由藍光和綠光完成。
K r y p t o n 蛋白質凝膠染色劑
K r y p t o n 蛋白質凝膠染色劑是受ZL保護的輕基喹啉 (hydroxyquinoline) 類染料配方 ，激發光譜為綠色，突光顯色為橙色 (Wolf et al. ,2007) 。 K r y p t o n Infrared 蛋白質凝膠
染色劑含受ZL保護的香豆素/氟喹諾酮和/或瑪蒂娜
(Martina) 型染 料 , 激發光譜為紅光/近紅外線，發射光譜為近紅外線 ( C z e m e y et al.
,2008)。可以買到這些產品的 10X 的組分 并 需 要 先 稀 釋 成 可 用 的 溶 液 。這 些 產 品 在 檢 測 靈 敏 度 和 動
態 線 性 范 圍 方 面 同S Y P R O R u b y 和 D e 印 P u r p l e
蛋白質凝膠染色劑相當。染色方案依照標準的固定-染色-快速脫色的工作流程，并在快速染色方面得到改進, 因此整個染色過程可在 1?4 h
完成；若要追求最高靈敏度和信號線性度, 可以延長此方案的時間。這些染色劑均可以和質譜分析兼容使用。
F l a m i n g o 蛋白質凝膠染色劑
Flamingo 蛋 白 質 凝膠染色劑是受ZL保護的基于香豆素的花青染料配方（Berkelm a n ，2006)。該染色方案需要在染色前完成固定。可以買到的染料為 I O X 的儲備液，使用前用水稀釋即可。當染料與蛋白質結合時表現出熒光增強作用。該染色劑背景較弱，報道稱短脫色步驟可使背景進一步減弱。激發光譜在綠光范圍內, 信號為橙色/紅色。該染色劑被認為與銀染和 S Y P R O R u b y 相當，并且也可以兼容質譜分析。
L U C Y 蛋白質凝膠染色劑
LUCY蛋白質凝膠染色劑是受ZL保護的三甲川花青(trimethinecyanine) 染料配方 , 在 S D S /蛋白質混合物中表現出熒光增強作用。染色通常在稀釋的乙酸中進行，方法與 S Y P R O O r a n g e —樣 。據報道該染色劑也能與質譜分析兼容 (Kovalska et al.,2006)。
琥珀醜亞胺酯是一種用于電泳前蛋白質樣品的共價氨基標記的電荷平衡的花青染料(Cydye)，它的研發和使用已成為熒光二維差異凝膠電泳（2- D D I G E ,—種非常重要的蛋白質組技術）的基礎（M i n d e n et al. ,2002; T o n g e et al. ,2001; W a g g o n e r et aL ,1993)。D I G E 在 第 30 章中有更詳細的討論。有許多熒光復合物的琥珀酰亞胺酯以及其他能反應的熒光共價蛋白質標記物也同樣被廣泛使用（H a u g l and ，2005)s 如今擁有了廣泛的儀器基礎，對任何熒光標記的蛋白質制備物組分進行凝膠分析已是常規步驟。