將凝血酶按比例加入血漿中，使其與血漿中的抗凝血酶結合成復合物，剩余的凝血酶作用于發色底物，釋出顯色基團對硝基苯胺。顯色的深淺與剩余凝血酶呈正相關，而與抗凝血酶復合物呈負相關。
根據受檢者吸光度（A值）從標準曲線中計算出AT:A的含量，即“血漿抗凝血酶活性”這一指標。
