Axugen的試劑盒已經很不錯了,要是提不出濃度很高的質粒,可以試試下面的一些方法：
1、增加收菌次數,相對提高了質粒的量,這樣的話裂解液的量可以適當增加；
2、裂解要充分,變性和復性按說明應該是不超過5分鐘,合理控制時間,一般在3分到4分半的時間都是可以的；
3、過柱子時,吸附的時間盡量長一些,可以在這期間做做其他實驗或者吃個飯什么的；
4、如果沒有必要,不使用去蛋白液,因為每過一遍柱子,其損耗越大,不過這得根據說明的菌種而定；
4、最后洗脫回收的時候,要單方面提高濃度,就要適當減少洗脫液的量,我一般都是回收到40~50 μL的,同時要增加洗脫次數,一般兩三次足矣.
如果以上方法都用遍了還無效,就應該考慮菌種本身的問題,是不是凍融或者傳代次數過高,導致質粒本身丟失?質粒本身在大腸桿菌的拷貝數是多少?不行的話建議重新將質粒導入到大腸桿菌感受態細胞中.