透析法除N十二烷基肌氨酸鈉實驗

發布時間：2019-09-13 15:46 原文鏈接：透析法除N十二烷基肌氨酸鈉實驗

試劑、試劑盒	冰醋酸三氟乙酸（TFA) 乙腈溶劑 A(0.1%TFA) 溶劑 B(80% 乙腈+0.086%TFA)
儀器、耗材	反相高效液相色譜（HPLC) 儀 C18 反相 HPLC 柱
實驗步驟	材料與設備反相高效液相色譜（HPLC) 儀 C18 反相 HPLC 柱（VYDAC?,4.6x250 mm) 冰醋酸三氟乙酸（TFA)(2% 水溶液儲液乙腈溶劑 A(0.1%TFA)(用 0.2-um 的尼龍膜過濾) 溶劑 B(80% 乙腈+0.086%TFA)（用 0.2-um 的尼龍膜過濾) 操作程序 1）用反相 HPLC 分析透析時和透析后所取的樣品（見 P.149)。 2) 各樣品取 100ul，加 5ul 冰醋酸，混勻。注：若樣品極渾濁或有沉淀，可在進樣前用微型離心機離心。 3)C18 柱經 0.1%TFA/水/乙腈系統平衡后，進 50ul 經乙酸調節過的樣品，215nm 檢測。進樣后，用溶劑 A 洗柱 5 min, 流速 1 ml/min。線性梯度洗脫：10 min 內從 100% 溶劑 A 至 100% 溶劑 B。再用溶劑 B 洗 3 min, 溶劑 A 洗 7 min。 4) 再進一系列稀釋的（0.005~0.075%)N-十二烷基肌氧酸鈉（SKL) 標準品，以 SKL 峰高為濃度的函數作圖。根據樣品的峰髙計算樣品中 SKL 的濃度，并以樣品中的 SKL 濃度為時間的函數作圖。 5) 色譜柱使用后，先用 20 mlMilli-Q 純水器制備的水沖洗，接著用 20 ml20% 甲醇沖洗，室溫保存。注：用 100 ml 緩沖液 A 和 5 冰醋酸配制一空白樣品，按上述方法分析。這可用來校正從柱上洗脫下來的任何溶劑峰。結果典型的反相 HPLC 色譜圖，見圖 3-6。展開

試劑、試劑盒

冰醋酸三氟乙酸（TFA) 乙腈溶劑 A(0.1%TFA) 溶劑 B(80% 乙腈+0.086%TFA)

儀器、耗材

反相高效液相色譜（HPLC) 儀 C18 反相 HPLC 柱

實驗步驟

材料與設備

反相高效液相色譜（HPLC) 儀

C18 反相 HPLC 柱（VYDAC?,4.6x250 mm)

冰醋酸

三氟乙酸（TFA)(2% 水溶液儲液

乙腈

溶劑 A(0.1%TFA)(用 0.2-um 的尼龍膜過濾)

溶劑 B(80% 乙腈+0.086%TFA)（用 0.2-um 的尼龍膜過濾)

操作程序

1）用反相 HPLC 分析透析時和透析后所取的樣品（見 P.149)。

2) 各樣品取 100ul，加 5ul 冰醋酸，混勻。
注：若樣品極渾濁或有沉淀，可在進樣前用微型離心機離心。

3)C18 柱經 0.1%TFA/水/乙腈系統平衡后，進 50ul 經乙酸調節過的樣品，215nm 檢測。進樣后，用溶劑 A 洗柱 5 min, 流速 1 ml/min。線性梯度洗脫：10 min 內從 100% 溶劑 A 至 100% 溶劑 B。再用溶劑 B 洗 3 min, 溶劑 A 洗 7 min。

4) 再進一系列稀釋的（0.005~0.075%)N-十二烷基肌氧酸鈉（SKL) 標準品，以 SKL 峰高為濃度的函數作圖。根據樣品的峰髙計算樣品中 SKL 的濃度，并以樣品中的 SKL 濃度為時間的函數作圖。

5) 色譜柱使用后，先用 20 mlMilli-Q 純水器制備的水沖洗，接著用 20 ml20% 甲醇沖洗，室溫保存。
注：用 100 ml 緩沖液 A 和 5 冰醋酸配制一空白樣品，按上述方法分析。這可用來校正從柱上洗脫下來的任何溶劑峰。

結果

典型的反相 HPLC 色譜圖，見圖 3-6。