酶測定中底物濃度的影響有哪些？

在檢測試劑中底物濃度、輔因子、活化劑、復構劑的種類和濃度均對酶的測定至關重要。其中以底物的種類和濃度最為重要。

底物濃度影響遵循米氏方程：

ν＝V[S]/K_m＋[S]

當底物濃度遠遠小于K_m，增加底物濃度，反應速度增加。

當底物[S]＞＞K_m時，公式近似為ν=V，反應速度不再增加，故此時反應速度為最大反應V。

從理論上說只有測定的是酶最大反應V，反應速度才和酶量成正比。

（1）底物的種類

若所測的酶專一性不強，可作用于多種底物，K_m最小的底物往往是此酶的生理底物。（K_m表示酶和底物的親和力，K_m越小親和力越大）

如該酶測定主要用于臨床診斷工作，首先應考慮有效診斷價值的底物。

選擇K_m小的底物測定酶活性，在最大反應速度時底物濃度也將最低。這意味著試劑成本可能較低，不易出現底物難溶解的困難。

（2）選擇底物的合適濃度

確定底物種類后，重要的是選擇底物的合適濃度。

米氏方程在選擇酶測定底物濃度有著重要的指導作用。

計算出某一酶的K_m后就可以計算出不同底物濃度和K_m間的比值，將其代入米氏方程就可以計算出此時酶促反應速度相當于最大反應速度的百分比。

上述只能適應用于單一底物的酶。