克隆與克隆化
·DNA克隆所謂克隆就是指同一副本或拷貝的集合。獲取同一拷貝的過程稱為克隆化。為某一研究目的，從眾多不同的分子群體中分離的某一感興趣分子，繼而經無性繁殖（擴增）產生的很多相同分子的集合，即為分子克隆。
DNA克隆就是應用酶學的方法，在體外將各種來源的遺傳物質與載體DNA結合成一具有自我復制能力的DNA分子——復制子，繼而通過轉化或轉染宿主細胞、篩選出含有目的基因轉化子細胞，再進行擴增、提取獲得大量同一DNA分子，即DNA克隆又稱重組DNA。
工具酶
在重組DNA技術中，常需要一些基本工具酶進行基因操作。
小結：
重組DNA技術常用工具酶
（1）限制性內切酶：識別特異序列，切割DNA。
（2）DNA連接酶：催化DNA中相鄰的5′磷酸基與3′羥基間形成磷酸二酯鍵，使DNA切口封合，連接DNA片段。（3）DNA聚合酶Ⅰ：a.合成雙鏈cDNA中第二條鏈。b.缺口平移制做探針。c.DNA序列分析。d.填補3′末端。（4）Taq酶催化PCR反應，聚合DNA。
（5）反轉錄酶a.合成cDNA。b.替代DNA聚合酶Ⅰ進行填補，標記或DNA序列分析。
（6）多聚核苷酸激酶催化DNA5′羥基末端磷酸化，或標記探針。
（7）堿性磷酸酶切除DNA5′末端磷酸基。
（8）末端轉移酶在3′羥基末端進行同系多聚核苷酸加尾。
（9）DNA酶：切割DNA（10）RNA酶：切割RNA。
在所在工具酶中，限制性核酶內切酶具有特別重要的意義。所謂限制性核酸內切酶就是識別DNA的特異序列，并在識別點或其周圍切割雙鏈DNA的一類內切酶。根據酶的組成，所需因子及裂解DNA方式的不同，可將限制性核酸內切酶分為三類。重組DNA技術中常用的限制性核酸內切酶為Ⅱ類酶，大部分Ⅱ類酶識別DNA位點的核苷酸序列呈二元旋轉對稱，通常稱這種特殊的結構順序為回文結構。