高效液相色譜分析陸英草中烏索酸含量

陸英(HerbaSambuciChinensis)系為忍冬科接骨木屬植物， 生于山坡、路旁、溪邊、荒野灌叢中。產于長江以南地區。據報道[1]陸英草含氯原酸、α-香樹脂素棕櫚酸酯(α-amyinpalmitate)、烏索 酸、β-谷甾醇、豆甾醇、油菜甾醇、硝酸鉀、黃酮、鞣質等。目前其它中藥材烏索酸含量的測定多采用比色法及薄層掃描[2]以及衍生化法氣相色譜檢測 [3]，其操作繁瑣，顯色及前處理誤差大，費事費力。

本文采用高效液相色譜法用甲醇-水為流動相，檢測波長210nm，在C18反相色譜柱上建立了其含量的測定方法，具有簡便可行、準確、快速、物質分離效果好的優點，重現性好，適應范圍廣，利于對陸英草的準確、深入研究。

實驗部分

一、儀器設備及試劑

Waters600EHplc系統，UV-2487可變波長檢測器，20ul定量環，M32數據處理工作站。

烏索酸對照品：中國醫學科學院藥物研究所95%乙醇(AR)甲醇(AR)水

二、實驗方法

1、色譜條件色譜柱:Waters-ODS150×4.6mm(5um);

流動相：甲醇-水(90：10);流速：0.8ml/min

UV波長：210nm;量程：0.005AUFS;溫度：25℃

數據處理：峰面積外標定量。

2、樣品處理

(1)將原料(樟樹醫藥公司)的葉粉碎過篩并恒重。

(2)稱取樣品10克，置索氏提取器中，加95%乙醇回流提取8小時，提取液濃縮定容于100毫升的容量瓶中，取上清液約5毫升過針式過濾器過濾，取濾液待測。

3、標準曲線的確定

分別吸取配好的5.0mg/ml烏索酸標準液0.4、0.8、1.6、2.8、3.6ml置于10ml容量瓶中，用甲醇稀釋成0.2、0.4、 0.8、1.4、1.8mg/ml系列標準溶液，在選定的色譜條件下，重復進3次每次20ul,以標準品峰面積與濃度關系得出回歸方程：

Y=3.35E 005X 8.74E 003R=0.9999

4、樣品測定

將預處理好的待測樣品液進樣20ul檢測，通過軟件操作的得出濃度值。

三、結果

1、烏索酸對照品與陸英樣品的色譜圖1

圖1圖2

2、方法重現性用兩個濃度水平進行連續和間隔時間及連續3天測定，考察方法重現性。結果：其最大相對標準偏差小于4.0%。

2、加標回收率吸取5.0mg/ml烏索酸標準液0.8、1.6、3.6各三份，分別加入原料樣品10克，按前法操作，測定結果，計算回收率結果為99.9%-100.8%，平均100.4%，RSD為1.0%。

討論

1、迷迭香中的烏索酸是非極性五環三萜類酸，在C18反相柱上有較大的保留值，以甲醇和水二元體系作為流動相，甲醇濃度與極性相近共存物質的分離及峰形有顯著影響，本法選定比例是考慮實際樣品組分分離確定的，對于其它品種樣品可作適當的調整。

2、檢測波長我們進行了波長掃描，烏索酸在205nm處有最大吸收峰，本法采用210nm，恒流比流動相洗脫對檢測無影響。

3、本法檢測出陸英草中平均含0.28%的烏索酸。

4、本法簡便、易行，準確快速。