氧化反應
與 3-磷酸甘油酸激酶（PGK）偶聯的還原反應
| 實驗方法原理 |
GAPDH，D-磷酸甘油醛；NADP+ 氧化還原酶（磷酸化）。 D-3-磷酸甘油醛 ＋ NAD＋? 1，3-磷酸甘油醛＋ NADH ＋ H＋ 酶的實驗既可以在正反應方向也可以在偶聯后的逆反應方向進行。正反應中，必須加入不穩定且很昂貴的 DL-3-磷酸甘油酸。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 3-磷酸甘油醛脫氫酶溶液 |
| 試劑、試劑盒 | 三乙醇胺 · HCl DL-磷酸甘油酸 NAD+ 砷酸二氫鉀 |
| 儀器、耗材 | 分光光度計 |
| 實驗步驟 |
實驗所需「試劑」具體見「其他」 0.98 ml 實驗混合物
0.02 ml 酶溶液 在 25℃ 時，于 340 nm 處吸收值降低。NADPH 的吸收系數 ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。
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| 注意事項 | |
| 其他 |
試劑： 0.1 mol/L 三乙醇胺 · HCl/NaOH pH 7.6（三乙醇胺 · HCl，Mr＝185.7；溶解 18.6 g 于 800 ml H2O 中，用 1 mol/L NaOH 調節至 pH 7.6，補充到 1 L） 0.3 mol/L DL-磷酸甘油酸（Mr＝170.1；不穩定，水狀溶液 50 mg/ml） 0.1 mol/L NAD+（游離酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中） 0.1 mol/L 砷酸二氫鉀（Mr＝180.0；180 mg 溶于 10 ml 水中）
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